簡(jiǎn)述

新橙皮苷不僅是一種重要的天然黃酮類化合物，而且還是合成新橙皮苷二氫查爾酮的重要原材料[1]。常溫常壓下，新橙皮苷是白色針狀晶體，易溶于熱水，溶于熱乙醇，不溶于乙醚。其遇三氯化鐵呈棕色。由鎂及鹽酸還原，呈紅色。在堿溶液中通入二氧化碳，也不析出。加2%鹽酸或硫酸進(jìn)行水解時(shí)，產(chǎn)生橘皮素、葡萄糖、鼠李糖各一分子。

新橙皮苷（Neohesperidin）和橙皮苷是同分異構(gòu)體，且能夠進(jìn)一步氫化生成新橙皮苷二氫查耳酮（Neohesperidindihydrochalcone,NHDC）,NHDC 比蔗糖甜 1000～1500 多倍且熱量低，不會(huì)影響人體的血糖和血脂水平，是一種具有巨大應(yīng)用潛力的食品添加劑[2]。

制備方法

新橙皮苷是一種植物類黃酮化合物，作為天然抗氧化劑，它可以在體內(nèi)發(fā)揮抗氧化作用，對(duì)健康有益。文獻(xiàn)報(bào)道的由橙皮苷轉(zhuǎn)化為新橙皮苷的生物酶法步驟如下[2]：

（1）使用α-L-鼠李糖苷酶特異性水解α-1,6-鼠李糖苷鍵生成橙皮素-7-O-葡萄糖苷（Hesperetin-7-O-glucoside,H7G）;

（2）以H7G為受體，UDP-Rha為供體，在柚子來(lái)源的α-1,2-鼠李糖基轉(zhuǎn)移酶（Cm1,2RhaT）的催化下特異性地在H7G的葡萄糖分子上合成α-1,2-鼠李糖苷鍵生成新橙皮苷。

雖然已有報(bào)道顯示，橙皮苷可以通過(guò)酶法水解和酸水解去除鼠李糖生成橙皮素-7-O-葡萄糖苷，但是目前已有的方法均不能選擇性去除鼠李糖基，會(huì)同時(shí)發(fā)生鼠李糖基和葡萄糖基的全部去除，不適合規(guī)模化應(yīng)用。目前對(duì)于柚子來(lái)源的鼠李糖基轉(zhuǎn)移酶（Cm1,2RhaT）的研究報(bào)道都集中在體外以H7G為受體底物轉(zhuǎn)鼠李糖基利用煙草細(xì)胞粗酶液生成產(chǎn)量較低的新橙皮苷（產(chǎn)量為0.05～0.08mM），規(guī)?；苽湫鲁绕ぼ者€面臨著巨大的挑戰(zhàn)。因此建立橙皮苷的鼠李糖基的選擇性酶法水解高效制備H7G，進(jìn)一步以H7G為底物建立新橙皮苷的一鍋生物酶法合成體系，實(shí)現(xiàn)綠色高效的以橙皮苷為原料制備新橙皮苷，具有重要的科學(xué)意義和應(yīng)用價(jià)值。

測(cè)定方法

高效液相色譜法測(cè)定柑橘皮中新橙皮苷含量的方法[3]，步驟如下：樣品用甲醇超聲提取，定容至50mL。以SinoChrom ODS-BP色譜柱(250mm×4.6mm,10μm)為分離柱，以甲醇-水(36+64)溶液作為流動(dòng)相，用紫外檢測(cè)器在波長(zhǎng)283nm處進(jìn)行測(cè)定。新橙皮苷質(zhì)量濃度在0.005 3～0.32g.L^-1范圍內(nèi)與其峰面積呈線性關(guān)系，方法的檢出限(3S/N)為0.6mg.L^-1。方法的平均回收率為90.3%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(n=6)為1.7%。

生理活性

為了研究新橙皮苷對(duì)脂肪細(xì)胞脂肪形成的影響及其作用機(jī)制，采用MTS法檢測(cè)新橙皮苷對(duì)3T3-L1前脂肪細(xì)胞的細(xì)胞活力的影響。確定新橙皮苷的作用濃度后，油紅O染色法和分光光度法測(cè)定3T3-L1脂肪細(xì)胞的分化及胞內(nèi)甘油三酯的含量，RT-PCR測(cè)定脂肪形成相關(guān)基因CCAAT增強(qiáng)子結(jié)合蛋白α(CCAAT/enhancer binding proteinα,C/EBPα)和過(guò)氧化物酶體增殖激活受體γ(Peroxisome proliferators-activated receptorγ,PPARγ)m RNA表達(dá)，Western蛋白印跡法檢測(cè)蛋白激酶B(Protein kinase B,PKB/Akt)、糖原合成酶激酶3β(Glycogen synthase kinase3β,GSK3β)和糖原合成酶(Glycogen synthase,GS)的磷酸化水平。利用GSK3β選擇性的抑制劑LiCl作用3T3-L1脂肪細(xì)胞后，檢測(cè)新橙皮苷對(duì)3T3-L1細(xì)胞分化、胞內(nèi)甘油三酯含量、C/EBPα、PPARγ及aP2蛋白表達(dá)的影響。

結(jié)果表明，新橙皮苷能極顯著抑制脂肪細(xì)胞分化和胞內(nèi)甘油三酯的形成(P<0.01)，激活A(yù)kt信號(hào)通路，促進(jìn)p-Akt和p-GSK3β水平增加，極顯著抑制C/EBPα、 PPARγ、 aP2 mRNA和蛋白表達(dá)(P<0.01)。新橙皮苷的這些影響部分地被GSK3β抑制劑LiCl所抑制(P<0.01)。故得出結(jié)論，新橙皮苷能夠通過(guò)激活A(yù)kt/GSK3β信號(hào)通路抑制脂肪細(xì)胞分化。

聚合研究

有關(guān)文獻(xiàn)公開(kāi)了一種新橙皮苷-柚皮苷簇聚體制備方法與應(yīng)用。首次發(fā)現(xiàn)柚皮苷和新橙皮苷可以互為增溶劑，柚皮苷和新橙皮苷可以穩(wěn)定地溶解在水中且不析出，可以得到濃度較高的新橙皮苷-柚皮苷水溶液，進(jìn)而拓寬新橙皮苷的應(yīng)用范圍。新橙皮苷-柚皮苷水溶液進(jìn)一步干燥，得到新橙皮苷-柚皮苷簇聚體，新橙皮苷-柚皮苷簇聚體加入適量的水中，經(jīng)過(guò)振搖或短時(shí)的超聲即可溶解。由于新橙皮苷-柚皮苷簇聚體溶解性提高，可以將新橙皮苷-柚皮苷簇聚體更方便、廣泛地在食品、醫(yī)藥和日化工業(yè)領(lǐng)域中應(yīng)用，以制備醫(yī)藥和日化產(chǎn)品[5]。

毒性研究

實(shí)驗(yàn)室研究顯示，新橙皮苷具有良好的降血糖和降血脂效果，具有潛在的臨床應(yīng)用價(jià)值。為了考察新橙皮苷的生殖發(fā)育毒性，包括親代動(dòng)物配子形成、交配、受孕、分娩、哺乳以及對(duì)子代生長(zhǎng)發(fā)育等過(guò)程的不良影響，為新橙皮苷的進(jìn)一步研發(fā)和應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)室資料。試驗(yàn)條件下，SD大鼠灌胃給予0.45、0.9、1.8 g/kg劑量新橙皮苷后，對(duì)生育力與早期胚胎發(fā)育以及圍產(chǎn)期未見(jiàn)明顯毒性反應(yīng)，對(duì)胚胎-胎仔的發(fā)育具有一定的毒性反應(yīng)，主要毒性可能為延緩骨骼骨化以及影響腦和食管發(fā)育[6]。

參考文獻(xiàn)

[1]陳春玉,李毅,黃超明,等.新橙皮苷的制備工藝及應(yīng)用進(jìn)展[J].天然氣化工(C1化學(xué)與化工),2014,39(03):81-87.

[2]季璇.新橙皮苷的一鍋生物酶法合成[D].山東大學(xué),2020.DOI:10.27272/d.cnki.gshdu.2020.007039.

[3]徐旭耀,蘇欣,汪秋安.高效液相色譜法測(cè)定柑橘皮中新橙皮苷[J].理化檢驗(yàn)(化學(xué)分冊(cè)),2012,48(03):342-344.

[4]郭莉霞,孔淑貞,殷鐘意,等.新橙皮苷對(duì)3T3-L1前脂肪細(xì)胞分化的影響及其作用機(jī)制[J].食品工業(yè)科技,2021,42(12):125-132.DOI:10.13386/j.issn1002-0306.20201001641.

[5]姜華,一種新橙皮苷—柚皮苷簇聚體及其制備方法與應(yīng)用.河南省,河南科技大學(xué),2021-01-01.

[6]林春琴.新橙皮苷生殖發(fā)育毒性研究[D].浙江大學(xué),2019.DOI:10.27461/d.cnki.gzjdx.2019.000961.