鏈霉親和素（Streptavidin，簡(jiǎn)稱(chēng)SA）是與親和素有相似生物學(xué)特性的一種蛋白質(zhì)，可抵抗蛋白酶消化、極端pH和溫度。生物素-鏈霉親和素復(fù)合物是最常見(jiàn)的標(biāo)志物之一，用于結(jié)合生物分子，如蛋白質(zhì)、脂質(zhì)和核酸，以及合成分子，如熒光標(biāo)記。在樣本制備領(lǐng)域，作為許多純化系統(tǒng)的核心部分，同時(shí)在WB、IHC、ISH、流式細(xì)胞術(shù)、化學(xué)發(fā)光領(lǐng)域發(fā)揮著巨大的作用。

鏈霉親和素，分子量約為65kDa，等電點(diǎn)6.0，是從鏈霉菌Streptomyces Avidinii培養(yǎng)物中提取的一種分泌性蛋白質(zhì)。鏈霉親和素是四聚體蛋白，一分子鏈霉親和素可以高度特異性地與四分子生物素結(jié)合。鏈霉親和素-生物素復(fù)合物的解離常數(shù)處于10mol/L數(shù)量級(jí)，是一種非常完美的生物素結(jié)合蛋白，其適用范圍也比親和素更為廣泛，這一特點(diǎn)也被常用在生物學(xué)上。

應(yīng)用領(lǐng)域

鏈霉親和素具有與生物素特異結(jié)合的能力，并能與辣根過(guò)氧化物酶、堿性磷酸酶、熒光基團(tuán)等結(jié)合，且等電點(diǎn)比親和素低，因而參與免疫學(xué)中的檢測(cè)信號(hào)放大，廣泛應(yīng)用于化學(xué)發(fā)光、IHC、WB、IF、ISH、流式、核酸提取、蛋白純化等實(shí)驗(yàn)及親和色譜填料的制備、生物傳感器、生物芯片的制作。

鏈霉親和素衍生物及其應(yīng)用舉例

根據(jù)鏈霉親和素不同的偶聯(lián)物，可以大致將其分為三個(gè)大類(lèi)：酶偶聯(lián)標(biāo)記的鏈霉親和素、熒光基團(tuán)標(biāo)記的鏈霉親和素、固化鏈霉親和素。

表1.常見(jiàn)鏈霉親和素衍生物分類(lèi)及其應(yīng)用

酶偶聯(lián)的鏈霉親和素主要的偶聯(lián)物是辣根過(guò)氧化物酶（HRP）和堿性磷酸酶（AP）。比較而言，前者更經(jīng)濟(jì)、快速、穩(wěn)定，而后者較前者更為靈敏。通常情況下，堿性磷酸酶（AP）更適合于固相的免疫檢測(cè)實(shí)驗(yàn)，如ELISA和WB。ELISA既可測(cè)定抗原也可測(cè)定抗體，生物素－鏈霉親和素系統(tǒng)在ELISA中的應(yīng)用有多種形式。其主要的應(yīng)用包括：

包被材料：在固相上先預(yù)包被鏈霉親和素，通過(guò)鏈霉親和素－生物素反應(yīng)而使生物素化的抗體或抗原間接包被。

放大信號(hào)：鏈霉親和素對(duì)生物素化的抗體是一個(gè)主動(dòng)的吸附過(guò)程，生物素化的抗體吸附在鏈霉親和素表面，且1分子鏈霉親和素可以結(jié)合4分子的生物素，此過(guò)程可以放大信號(hào)。

圖2.生物素化抗體與鏈霉親和素互作示意圖

常見(jiàn)標(biāo)記鏈霉親和素的熒光基團(tuán)有：FITC、TRITC、花青染料（Cy2、Cy3、Cy5）、Alexa Fluor系列、Dylight系列等。FITC是廣泛使用的熒光基團(tuán)，但其的缺點(diǎn)是淬滅快，使用抗淬滅劑可以減緩淬滅速度，TRITC經(jīng)常和FITC一起用于雙標(biāo)記實(shí)驗(yàn)中。DyLight熒光染料是一類(lèi)具有較高亮度的新型染料，具有很好的光譜寬度、更強(qiáng)的熒光強(qiáng)度，更高的光學(xué)耐受性（抗淬滅性）、對(duì)pH不敏感、分子較小而滲透性更好的優(yōu)勢(shì)。由于觀察熒光需要一定波長(zhǎng)的激發(fā)光，必須根據(jù)實(shí)驗(yàn)室已有的儀器可發(fā)光的波段進(jìn)行選擇。

表2.熒光染料對(duì)應(yīng)表

鏈霉親和素瓊脂糖是基于鏈霉親和素與生物素之間的相互作用，將鏈霉親和素高度交聯(lián)于6%瓊脂糖上，獨(dú)特的制備工藝使其具有更高的物理化學(xué)特性，可以耐受更高的壓力，在相對(duì)較高的流速下，實(shí)現(xiàn)對(duì)目的蛋白的純化，更適于工業(yè)大規(guī)模蛋白的純化。