考馬斯藍(lán) R250 是一種陰離子染料,可以和蛋白質(zhì)結(jié)合,可用于定量蛋白質(zhì)的相對豐度,也可用于(2-DE)凝膠的差異表達(dá)分析。雖然考馬斯藍(lán)染色的靈敏度比銀染色低50倍,但考馬斯藍(lán)染色是一種相對簡單且定量性更高的方法。方法就是將凝膠浸泡在染料溶液中。在脫色步驟中,未與蛋白質(zhì)結(jié)合的染料會(huì)從凝膠中擴(kuò)散出來。蛋白質(zhì)在透明背景上被檢測為藍(lán)點(diǎn)或條帶。該方法可用于1-DE和2-DE之后的蛋白質(zhì)染色。該方法的檢測范圍為50-200ng蛋白質(zhì)。
配制方法
配制1L的考馬斯亮藍(lán)染色溶液:將1g考馬斯R250溶解到300ml甲醇中。然后加入650毫升dd水和50毫升乙酸。在無磁攪拌器上攪拌溶液2小時(shí)。該溶液可以通過濾紙過濾以去除不溶性染料。該溶液可在20oC下儲(chǔ)存數(shù)月。
注意事項(xiàng)
使用過程請戴好一次性手套,做好防護(hù)。
回收用染色液請單獨(dú)存放,勿與未使用染色液混合。
如果染色液混濁或含有沉淀物,請勿使用。包括顏色、pH變化或物理特性的變化可能會(huì)影響產(chǎn)品使用效果。
使用過程中染色液如灑漏桌面,可用酒精溶液擦拭干凈。