麗春紅染色液(又名酸性紅112,也有人叫猩紅)是一種紅色染料,也是一種重氮染料,用于WB中蛋白質(zhì)的可逆染色。1986年,O Salinovich和R C Montelaroused 首次將其作為考馬斯亮藍(lán)色染色的替代品。
應(yīng)用領(lǐng)域
麗春紅染色液既可以對(duì)NC膜進(jìn)行染色,也可以對(duì)PVDF膜進(jìn)行染色。注意通常不對(duì)尼龍膜進(jìn)行染色,因?yàn)槿旧汉湍猃埬?qiáng)烈結(jié)合并產(chǎn)生高背景。
麗春紅染色液的檢測(cè)蛋白質(zhì)的下限是200ng。雖然檢測(cè)能力很低,但由于其染色的可逆性和與其他染色液相比價(jià)格低廉,它是最常用的染色液之一。由于可逆染色(對(duì)蛋白質(zhì)沒有不利的影響),所以染色后的樣品可用于其他下游檢測(cè),如免疫印跡和蛋白質(zhì)測(cè)序等。
染色原理
麗春紅染色液本身帶大量的負(fù)電荷,因此可以和氨基酸上的正電荷結(jié)合,另外麗春紅染色液也能夠和蛋白質(zhì)的非極性區(qū)結(jié)合,從而使蛋白質(zhì)呈現(xiàn)紅色。
染色步驟
(1)取出待染色的膜,用TBST或PBST洗一遍。
(2)加入麗春紅染色液將膜浸沒,室溫孵育1小時(shí),染色時(shí)間相對(duì)靈活。
(3)回收麗春紅染色液(可以重復(fù)使用)。用蒸餾水清洗去除背景。
(4)染色的膜可以在溫室或者4℃保存。
麗春紅染色液脫色:用5%的醋酸和0.1M NaOH溶液。脫色液可用蒸餾水或者PBS。