特戈拉贊是一種新型的鉀離子競(jìng)爭(zhēng)性酸阻滯劑，自2018年7月起，特戈拉贊在韓國(guó)被批準(zhǔn)用于治療 胃食管反流病、胃潰瘍和根除幽門螺桿菌。R-5,7-二氟苯并二氫吡喃-4-醇是合成特戈拉贊的重要中間體，目前合成R?5,7?二氟苯并二氫吡喃?4?醇主要是采取化學(xué)法合成，此類方法主要使用手性催化劑達(dá)到不對(duì)稱氫化的效果，存在手性催化劑價(jià)格昂貴、產(chǎn)品提純困難、收率不理想、環(huán)境污染等不足。與化學(xué)合成相比，酶催化具有反應(yīng)條件溫和、立體選擇性高、催化活性高后處理簡(jiǎn)單等特點(diǎn)。

分析方法

HPLC分析方法：分析柱 CHIRALPAK?AD?H，流動(dòng)相分別為正己烷和異丙醇，流速1.2ml/min，柱溫25℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為220nm，分析時(shí)間30min，R-5,7-二氟苯并二氫吡喃-4-醇的保留時(shí)間為12.126min，S?5,7?二氟苯并二氫吡喃?4?醇的保留時(shí)間為10.862min，5,7? 二氟苯并二氫吡喃?4?酮的保留時(shí)間為9.398min[1]。

合成方法

稱取29.3g葡萄糖，攪拌下溶解于650ml純水中，加入5,7?二氟苯并二氫吡喃?4?酮20g、表達(dá)酮還原酶SDR的濕菌體20g、表達(dá)葡萄糖脫氫酶GDH的的濕菌體3.3g、充分?jǐn)嚢杈鶆蚝?，加?.02g NADP，30℃，通過堿液(5M NaOH溶液)控制pH＝7.0，反應(yīng)24h，取樣用無水乙醇淬滅反應(yīng)，用HPLC分析方法檢測(cè)轉(zhuǎn)化率，5,7?二氟苯并二氫吡喃?4?酮的轉(zhuǎn)化率為99.5％。

反應(yīng)結(jié)束后，將體系升溫至70℃，保溫30min滅菌，滅菌完畢后，將體系降溫至5?10℃，加入20g硅藻土，過濾，收集濾餅，濾餅用60ml無水乙醇萃取2?3遍，蒸干溶劑，即得R-5,7-二氟苯并二氫吡喃-4-醇粗品19.4g，收率：96％，根據(jù)上述HPLC分析方法檢測(cè)光學(xué)純度，ee值99.4％。

將上步所得粗品加入60ml純水中，維持體系溫度30度，攪拌5h，降溫至0?5℃，抽濾，濾餅用少量純水洗滌，收集濾餅至45℃鼓風(fēng)烘箱干燥24h，即得R-5,7-二氟苯并二氫吡喃-4-醇純品19.08g，收率：94 .4％，根據(jù)根據(jù)上述HPLC分析方法檢測(cè)光學(xué)純度，ee值99.9％。采用純水進(jìn)行打漿，可以將產(chǎn)品手性值提高至99.9％，且產(chǎn)品損失少[1]。

參考文獻(xiàn)

[1]上海銳康生物技術(shù)研發(fā)有限公司,上海柏獅生物科技有限公司. 一種R-5,7-二氟苯并二氫吡喃-4-醇的制備方法:CN202210486605.0[P]. 2022-09-09.