背景^[1-3]

NCI-H1048人小細(xì)胞肺癌貼壁細(xì)胞系是一種廣泛用于肺癌研究的人源性細(xì)胞系。這種細(xì)胞系具有小細(xì)胞肺癌的典型特征，可以用于探討肺癌的發(fā)生機(jī)制、研究抗癌藥物的作用以及篩選新的治療策略等。

NCI-H1048人小細(xì)胞肺癌貼壁細(xì)胞系具有以下典型特征：

細(xì)胞形態(tài)：NCI-H1048細(xì)胞系為小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系，其細(xì)胞形態(tài)較小，呈現(xiàn)出圓形或卵圓形。

生長(zhǎng)特性：NCI-H1048細(xì)胞系為貼壁生長(zhǎng)型細(xì)胞系，需要在固體培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，并且需要特定的培養(yǎng)條件。

染色體數(shù)目異常：NCI-H1048細(xì)胞系的染色體數(shù)目異常，通常存在非整倍體現(xiàn)象。

表達(dá)腫瘤特異性抗原：NCI-H1048細(xì)胞系表達(dá)腫瘤特異性抗原，這些抗原可以作為腫瘤免疫治療的靶點(diǎn)。

對(duì)化療藥物的敏感性：NCI-H1048細(xì)胞系對(duì)化療藥物較為敏感，可用于抗癌藥物的研究和篩選。

NCI-H1048人小細(xì)胞肺癌貼壁細(xì)胞系

NCI-H1048人小細(xì)胞肺癌貼壁細(xì)胞系細(xì)胞培養(yǎng)操作

1)復(fù)蘇NCI-H1048人小細(xì)胞肺癌貼壁細(xì)胞系細(xì)胞：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)為主。

將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2)NCI-H1048人小細(xì)胞肺癌貼壁細(xì)胞系細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤(rùn)所有細(xì)胞，棄去消化液，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 min，然后在顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

c、按6-8 mL/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后裝入無(wú)菌離心管中，1000 rpm離心4 min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。

d、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

3)NCI-H1048人小細(xì)胞肺癌貼壁細(xì)胞系細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例；

a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無(wú)菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。

b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無(wú)血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。

c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

應(yīng)用^[4-5]

NCI-H1048人小細(xì)胞肺癌貼壁細(xì)胞系可以用于8-溴-7-甲氧基白楊素對(duì)IL-6誘導(dǎo)小細(xì)胞肺癌發(fā)生EMT作用的影響

1.研究IL-6誘導(dǎo)對(duì)人小細(xì)胞肺癌NCI-H446及NCI-H1048人小細(xì)胞肺癌貼壁細(xì)胞系細(xì)胞發(fā)生上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)換(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的表型作用。

2.證明在人小細(xì)胞肺癌NCI-H446及NCI-H1048人小細(xì)胞肺癌貼壁細(xì)胞系細(xì)胞中,IL-6激活STAT3信號(hào)通路的表達(dá)。

3.測(cè)定8-溴-7-甲氧基白楊素(8-bromo-7-methoxychrysin,BrMC)對(duì)IL-6誘導(dǎo)人小細(xì)胞肺癌NCI-H446及NCI-H1048人小細(xì)胞肺癌貼壁細(xì)胞系細(xì)胞EMT的影響。

方法:1.人小細(xì)胞肺癌NCI-H446及NCI-H1048人小細(xì)胞肺癌貼壁細(xì)胞系細(xì)胞體外培養(yǎng)。

2.PCR分析人小細(xì)胞NCI-H446及NCI-H1048人小細(xì)胞肺癌貼壁細(xì)胞系細(xì)胞IL-6受體和凋亡蛋白抑制因子(Inhibitor of apoptosis protein,IAP)mRNA表達(dá)。

3.用相差顯微鏡觀(guān)察IL-6誘導(dǎo)人小細(xì)胞肺癌NCI-H446及NCI-H1048人小細(xì)胞肺癌貼壁細(xì)胞系細(xì)胞EMT形態(tài)變化。

4.Western blot分析IL-6誘導(dǎo)人小細(xì)胞肺癌NCI-H446及NCI-H1048人小細(xì)胞肺癌貼壁細(xì)胞系細(xì)胞STAT3、p-STAT3、E-cadherin、N-cadherin蛋白表達(dá)的影響。

5.Western blot分析BrMC對(duì)IL-6誘導(dǎo)人小細(xì)胞肺癌NCI-H446及NCI-H1048人小細(xì)胞肺癌貼壁細(xì)胞系的EMT表型以及STAT3、p-STAT3、E-cadherin、N-cadherin蛋白表達(dá)的影響。

結(jié)果:1.IL-6能誘導(dǎo)人小細(xì)胞肺癌NCI-446細(xì)胞發(fā)生EMT細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變,其從上皮細(xì)胞形態(tài)轉(zhuǎn)變成多邊形、梭形,有偽足生成。

2.IL-6激活人小細(xì)胞肺癌NCI-H446細(xì)胞STAT3信號(hào)通路,p-STAT3、N-cadherin蛋白表達(dá)顯著上調(diào)(P<0.05)、E-cadherin蛋白表達(dá)顯著下調(diào)(P<0.05)。

3.BrMC能顯著抑制IL-6誘導(dǎo)的EMT表型。

4.BrMC能顯著上調(diào)IL-6誘導(dǎo)EMT表型E-cadherin的表達(dá)(P<0.05),并顯著下調(diào)STAT3、p-STAT3蛋白和N-cadherin蛋白的表達(dá)(P<0.05)。

結(jié)論:1.BrMC能有效抑制IL-6誘導(dǎo)人小細(xì)胞肺癌NCI-H446細(xì)胞EMT。2.BrMC抑制EMT發(fā)生的作用機(jī)制可能與其下調(diào)p-STAT3蛋白表達(dá)相關(guān)。

參考文獻(xiàn)

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[5]唐甜.8-溴-7-甲氧基白楊素對(duì)IL-6誘導(dǎo)小細(xì)胞肺癌發(fā)生EMT作用的影響[D].南華大學(xué),2018.