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什么是流式細胞分選?

2025/8/13 15:46:29 作者:小滿

細胞分選(cell sorting)是根據(jù)細胞所具有的特性將某種特定的細胞亞群從混合的細胞樣品中分離出來的一種技術,是細胞學研究的重要課題。在需要對某種特定的細胞進行功能分析時,如對細胞培養(yǎng)上清液通過ELISA分析檢測細胞分子、細胞共培養(yǎng)檢測細胞功能等研究都以獲得高純度的目的細胞為前提。

細胞分選

常見細胞分選的方法有兩大類:一類是基于免疫識別特性的方法包括流式細胞分選和免疫磁性細胞分選;另一類是基于細胞物理性質的密度梯度離心法,它主要是由于不同細胞群之間存在沉降系數(shù)差異,在一定的離心力作用下不同種類的細胞會以各自不同的速度沉降,在密度梯度不同的區(qū)域會形成區(qū)帶,從而實現(xiàn)分選目的,但分離得到細胞純度低且特異性差導致應用較少,本文不做過多介紹。以下重點介紹基于免疫識別特性的兩種分選方法。

流式細胞分選

流式細胞分選是在流式細胞術檢測細胞表型的基礎上,使用充電分選技術以實現(xiàn)多種特定表型細胞的分離。具有分選參數(shù)多、群體多、純度高、靈活性強等優(yōu)勢。分選后細胞可做進一步分子生物學研究如熒光定量PCR、WB、細胞培養(yǎng)等。

分選型流式細胞儀一般由液流系統(tǒng)、光路系統(tǒng)、檢測分析系統(tǒng)和分選系統(tǒng)4部分組成。分選功能是通過鞘液流形成的含有細胞的帶電液滴而實現(xiàn)的,在流動室的噴嘴上裝有一個高速振蕩器,該裝置充電后以每秒幾萬次的振動頻率使鞘液流成為上萬個液滴,細胞在進入液滴之前已經(jīng)被測定,如果其特性與被選定要進行分選的細胞特性相符,則儀器會對此細胞形成液滴時給整個液柱充以指定的電荷(對標有熒光素的細胞液滴帶以負電荷;未標記熒光素的細胞液滴帶以正電荷;而不含有細胞的液滴則不被帶電荷)。這樣,當被選定的細胞形成液滴時就帶有特定的電荷,未被選定的細胞和空白液滴不被充電,即不帶電荷。當充以不同電荷的含細胞的鞘液流經(jīng)帶有正負幾千伏恒定電場的偏轉板時,就根據(jù)自身所帶的電荷性質產(chǎn)生偏差而落入各自的收集管中,不帶電荷的液滴就進入廢液槽中,從而實現(xiàn)細胞分選的目的。

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