背景^[1-3]

大鼠前列腺素E1(PGE1)Elisa試劑盒用于測定血清，血漿及相關(guān)液體樣本中大鼠前列腺素E1(PGE1)的含量。

大鼠前列腺素E1(PGE1)Elisa試劑盒原理：應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中大鼠前列腺素E1(PGE1)水平。用純化的大鼠前列腺素E1(PGE1)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入樣本及標(biāo)準(zhǔn)品，再與HRP標(biāo)記的大鼠前列腺素E1(PGE1)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的大鼠前列腺素E1(PGE1)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中大鼠前列腺素E1(PGE1)濃度。

大鼠前列腺素E1(PGE1)Elisa試劑盒

大鼠前列腺素E1(PGE1)Elisa試劑盒樣品收集、處理及保存方法

1）血清-----操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。

2）血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。

3）細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4）組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液

5）保存------如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-70℃保存，避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

大鼠前列腺素E1(PGE1)Elisa試劑盒使用前準(zhǔn)備

1）標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋應(yīng)在實(shí)驗(yàn)時(shí)準(zhǔn)備，不能儲(chǔ)存。稀釋前將標(biāo)準(zhǔn)品振蕩混勻。

2）洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋。

大鼠前列腺素E1(PGE1)Elisa試劑盒操作步驟

1）使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時(shí)加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。

2）根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。

3）加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時(shí)。

4）甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。

5）每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。

6）甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。

7）每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。

8）取出酶標(biāo)板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。

9）在450nm波長處測定各孔的OD值。

應(yīng)用^[4][5]

大鼠前列腺素E1(PGE1)Elisa試劑盒可以用于炎癥因子在前節(jié)內(nèi)眼手術(shù)誘發(fā)血視網(wǎng)膜屏障破壞中的作用及機(jī)制研究

炎癥因子在眼前節(jié)內(nèi)眼手術(shù)誘發(fā)血-視網(wǎng)膜屏障破壞中的作用目的:研究炎癥因子[前列腺素E1（PGE1）、前列腺素E2（PGE2）、前列腺素F2α（PGF2α）、白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）和腫瘤壞死因子-α（TNF-α）]在眼前節(jié)內(nèi)眼手術(shù)誘發(fā)BRB破壞中的作用。

方法:1、大鼠動(dòng)物模型房水和玻璃體中炎癥因子濃度的檢測:實(shí)驗(yàn)分對(duì)照組和模型組。大鼠造模后4h、1d、2d、3d、5d和7d采用酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)（大鼠前列腺素E1(PGE1)Elisa試劑盒）檢測大鼠動(dòng)物模型房水和玻璃體中PGE1、PGE2、PGF2α、IL-1β和TNF-α的濃度。2、前房注射炎癥因子對(duì)BRB的影響:實(shí)驗(yàn)分空白對(duì)照組、陰性對(duì)照組和炎癥因子組?？瞻讓?duì)照組大鼠未進(jìn)行任何操作;陰性對(duì)照組用微量注射器大鼠前房穿刺注入10uL生理鹽液;炎癥因子組根據(jù)Elisa檢測大鼠動(dòng)物模型房水中PGE1、PGE2、PGF2α、IL-1β和TNF-α的濃度,大鼠前房分別注射PGE1、PGE2、PGF2α、IL-1β和TNF-α。注射后4h和48h后采用Elisa技術(shù)檢測大鼠動(dòng)物模型房水和玻璃體中PGE1、PGE2、PGF2α、IL-1β和TNF-α的濃度;采用Evans藍(lán)作為示蹤劑定量檢測BRB的破壞程度。3、炎癥因子拮抗劑抵抗炎癥因子誘發(fā)的BRB破壞:PGE1、PGE2和PGF2α實(shí)驗(yàn)分為陰性對(duì)照組、模型組、NSAIDs預(yù)防治療組、NSAIDs治療組、皮質(zhì)類固醇預(yù)防治療組和皮質(zhì)類固醇治療組。每組各時(shí)間點(diǎn)各4只大鼠。陰性對(duì)照組大鼠用生理鹽水眼液點(diǎn)眼,tid;模型組制造大鼠動(dòng)物模型,用生理鹽水眼液點(diǎn)眼,tid;NSAIDs預(yù)防治療組制造大鼠動(dòng)物模型,造模前2d開始用普南撲林眼液點(diǎn)眼,tid;NSAIDs治療組制造大鼠動(dòng)物模型,造模后開始用普南撲林眼液點(diǎn)眼,tid;皮質(zhì)類固醇預(yù)防治療組制造大鼠動(dòng)物模型,造模前2d開始用百力特眼液點(diǎn)眼,tid;皮質(zhì)類固醇治療組制造大鼠動(dòng)物模型,造模后開始用百力特眼液點(diǎn)眼,tid。IL-1β和TNF-α實(shí)驗(yàn)分為陰性對(duì)照組、模型組和治療組。每組各時(shí)間點(diǎn)各4只大鼠。陰性對(duì)照組用微量注射器大鼠前房穿刺注入10uL生理鹽液;模型組制造大鼠動(dòng)物模型,然后用微量注射器向大鼠前房穿刺注入10uL生理鹽液;治療組制造大鼠動(dòng)物模型,然后用微量注射器向大鼠前房穿刺分別注入IL-1β抗體和TNF-α抗體。造模后4h和48h后采用Elisa技術(shù)(大鼠前列腺素E1(PGE1)Elisa試劑盒)檢測大鼠動(dòng)物模型房水和玻璃體中PGE1、PGE2、PGF2α、IL-1β和TNF-α的濃度;采用Evans藍(lán)作為示蹤劑定量檢測BRB的破壞程度。

參考文獻(xiàn)

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