背景及概述[1][2]
小豆蔻明(Cardamonin)為黃色針晶，易溶于甲醇、乙醇、醋酸乙酯，乙醚，稀堿溶液，難溶于水，與醋酸鉛反應(yīng)呈黃色沉淀。小豆蔻明可以明顯抑制絡(luò)氨酸酶的活性，同時(shí)可以有效抑制黑色素細(xì)胞增殖和黑色素的合成，效果明顯超過(guò)其他成分。小豆蔻明來(lái)源于我國(guó)傳統(tǒng)的中草藥，具有較好的安全性和資源優(yōu)勢(shì)，用于皮膚美白和抑制皮膚色素沉著性疾病方面會(huì)有很大的市場(chǎng)前景(中國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)?zhí)?00910055818.2)。藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)二者在抑制血小板聚集、抑制腫瘤形成以及抗炎抑菌方面均有較強(qiáng)活性，并且毒性很低，安全性好。
制備[1]
小豆蔻明的提取方法目前主要有乙醇提取法、乙醚提取法、丙酮提取法、氯仿提取法等，采用硅膠柱層析。這些提取分離方法得到的小豆蔻明含量較低，得率低，提取時(shí)間長(zhǎng)，一般作為化學(xué)成分研究實(shí)驗(yàn)室少量制備方法。史道華等采用95％乙醇浸漬3天，以8倍量乙醇回流2次，每次2小時(shí)，減壓回收乙醇得600ml濃縮液，濃縮液制成水混懸液后用乙酸乙酯、正丁醇依次萃取，萃取液減壓回收溶劑，濃縮后得340g浸膏，浸膏溶于適量丙酮，拌樣，用相當(dāng)于固體5倍量的硅膠濕法裝柱，石油醚-乙酸乙酯系統(tǒng)洗脫，收集各洗脫部分，與對(duì)照品在同一薄層板上點(diǎn)樣，分別以甲苯-乙酸乙酯-甲醇(15∶4∶1)、三氯甲烷-甲醇(20∶1)展開(kāi)，紫外燈(波長(zhǎng)365nm)下觀察，合并于對(duì)照品相應(yīng)位置出現(xiàn)暗斑的餾分，常壓濃縮得13g混晶?；炀г龠^(guò)硅膠柱，洗脫劑為石油醚-乙酸乙酯-丙酮系統(tǒng)，濃縮后得5g晶體。取100g凝膠用甲醇溶脹過(guò)夜，裝柱，晶體溶于甲醇后取20ml上柱，按每份3ml進(jìn)行收集，薄層(TLC)分析并用標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照，合并相同餾分后濃縮，得橙黃色針狀晶體4.2g，該方法雖然比丙酮提取法有顯著提高，提取率為0.084％，但提取率仍然很低，提取時(shí)間長(zhǎng)，有機(jī)溶劑萃取萃取率低、損失較大。
CN201010235806.0提供一種提取率高、周期短、高純度的小豆蔻明的提取方法。
技術(shù)方案：為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供的一種從草豆蔻中提取小豆蔻明的方法，具體包括以下步驟：a.提取步驟：取適量草豆蔻種子，粉碎至20-60目，以冷滲、溫浸或回流提取法，將草豆蔻種子粉以溶劑提取1-3次，合并提取液，減壓濃縮得浸膏；b.有機(jī)溶劑萃取步驟：將浸膏用石油醚萃取至萃取液近無(wú)色，棄去石油醚萃取液，保留剩余浸膏；c.分離純化步驟：將剩余浸膏采用柱層析分離，用水、甲醇、乙醇、乙酸乙酯、丙酮、二氯甲烷或它們的混合溶液洗脫，高效液相色譜監(jiān)測(cè)，收集含小豆蔻明的流出液，此流出液經(jīng)濃縮后用有機(jī)溶劑結(jié)晶即可獲得高純度小豆蔻明。本方法提供的小豆蔻明的提取方法和現(xiàn)有技術(shù)相比具有以下優(yōu)點(diǎn)：(1)本發(fā)明提供的方法路線設(shè)計(jì)合理，方法簡(jiǎn)單易操作；(2)本發(fā)明提供的方法周期短、提取率高、產(chǎn)品純度高；(3)本發(fā)明提供的方法中所用溶劑和柱層析填料均可回收循環(huán)利用，可降低成本，是一種低成本、循環(huán)型的工藝。
檢測(cè)方法[2]
而目前常采用于測(cè)定草豆蔻主要成分山姜素和小豆蔻明含量的技術(shù)方法為：高效液相色譜，薄層色譜法和膠束電動(dòng)毛細(xì)管色譜法。這幾種方法中，高效液相色譜法操作條件不易控制且較繁瑣，時(shí)間過(guò)長(zhǎng)。薄層色譜法樣品用量較大，分 離手續(xù)麻煩，分離時(shí)間較長(zhǎng)，并可能有雜質(zhì)干擾。而膠束電動(dòng)毛細(xì)管色譜法容易產(chǎn)生氣泡，柱子易斷，檢測(cè)靈敏度低，填料種類(lèi)有限等。為了解決這些問(wèn)題，就必須改善現(xiàn)有的技術(shù)，使其具備操作簡(jiǎn)單，準(zhǔn)確快速可行的方法。并且在將草豆蔻制成現(xiàn)代化中藥制劑的生產(chǎn)過(guò)程中，快速準(zhǔn)確的測(cè)定其濃度是非常重要的一個(gè)步驟，所以CN201510272183.7提供的方法就可以快速的完成這個(gè)檢測(cè)任務(wù)。
技術(shù)方案是：一種利用紫外分光光度法測(cè)定草豆蔻主要活性成分含量的方法，包括標(biāo)準(zhǔn)樣品溶 液的制備，標(biāo)準(zhǔn)曲線線性回歸方程的獲得，待測(cè)樣品的制備，紫外檢測(cè)及濃度的計(jì)算，所述 的待測(cè)樣品的制備，紫外檢測(cè)及濃度的計(jì)算包括如下步驟：a. 待測(cè)樣品的制備：將草豆蔻樣品烘干，分別用粉碎機(jī)粉碎后過(guò)目篩，精確稱(chēng)取 草豆蔻粉末5g,置于試劑瓶中加95%乙醇定容100mL，超聲溶解，再放置過(guò)夜，過(guò)濾，取續(xù)濾液 過(guò)微孔濾膜，最后的濾液分裝備用；b. 待測(cè)樣品的紫外檢測(cè)：采用紫外分光光度法測(cè)定草豆蔻溶于95%乙醇的樣品提 取液在286nm和346nm處的吸光度；c. 待測(cè)樣品濃度的計(jì)算：將“b”步驟測(cè)得的草豆蔻樣品溶液分別在286nm和346nm 處的吸光度平均值作為山姜素和小豆蔻明含量的測(cè)定值，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線線性回歸方程，計(jì) 算出待測(cè)樣品中山姜素和小豆蔻明的含量。
主要參考資料
[1] CN201010235806.0 一種從草豆蔻中提取小豆蔻明的方法
[2]CN201510272183.7利用紫外分光光度法測(cè)定草豆蔻主要活性成分含量的方法