紅細(xì)胞裂解液是一種含有特殊成分的溶解液，主要用于將紅血細(xì)胞溶解，使其內(nèi)部的細(xì)胞器、蛋白質(zhì)和其他細(xì)胞組分釋放出來。這樣一來，研究人員可以更方便地進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)分子的研究和分析。裂解液裂解是一種比較溫和且簡便易行的紅細(xì)胞去除方法，它既不損傷有核細(xì)胞又能充分的去除紅細(xì)胞。主要用于經(jīng)酶消化分散的組織細(xì)胞的分離純化，淋巴細(xì)胞的分離純化以及組織細(xì)胞蛋白與核酸提取等實(shí)驗(yàn)中紅細(xì)胞的去除。下面分別是針對組織細(xì)胞與血液樣本的處理方法。

組織細(xì)胞

1．新鮮組織經(jīng)過膠原酶或胰酶等消化處理，通過適當(dāng)方法分散成細(xì)胞懸液，離心棄上清。

2．加入3-5倍細(xì)胞體積的紅細(xì)胞裂解液，輕輕吹打混勻，裂解1-2 min。例如細(xì)胞沉淀的體積為1 mL，則加入3-5 mL的紅細(xì)胞裂解液。本步驟在室溫或4℃操作均可。

3．400-500 g離心5 min，棄紅色上清。4oC離心效果更佳。

4．如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不完全，可以重復(fù)上述步驟2和步驟3一次。通常極微量的紅細(xì)胞不會影響后續(xù)的一些檢測。

5．洗滌1-2次：加入適量PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液，重懸沉淀，400-500 g離心2-3 min，棄上清?？稍僦貜?fù)1次，共洗滌1-2次。洗滌液的用量通常應(yīng)至少為細(xì)胞沉淀體積的5倍。4oC離心效果更佳。

6．根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀后即可進(jìn)行計數(shù)等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

血液樣本

1．取新鮮抗凝血，400-500 g離心5 min，棄上清。

2．加入6-10倍細(xì)胞體積的紅細(xì)胞裂解液，輕輕吹打混勻，裂解1-2 min。例如細(xì)胞沉淀的體積為1 mL，則加入6-10 mL的紅細(xì)胞裂解液。本步驟在室溫或4度操作均可。注意：對于鼠的血液，裂解1-2 min已經(jīng)足夠，對于人的外周血，宜延長裂解時間至4-5 min，并且裂解過程中宜適當(dāng)偶爾搖動以促進(jìn)紅細(xì)胞裂解。

3．400-500 g離心5 min，棄紅色上清。 4oC離心效果更佳。

4．如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不完全，可以重復(fù)上述步驟2和步驟3一次。通常極微量的紅細(xì)胞不會影響后續(xù)的一些檢測。

5．洗滌1-2次：加入適量PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液，重懸沉淀，400-500 g離心2-3 min，棄上清?？稍僦貜?fù)1次，共洗滌1-2次。洗滌液的用量通常應(yīng)至少為細(xì)胞沉淀體積的5倍。4oC離心效果更佳。

6．根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀后即可進(jìn)行計數(shù)等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

注意：對于微量或少量的血液樣品，可以在步中不進(jìn)行離心棄上清的操作，直接在第二步中加入10倍血液體積的紅細(xì)胞裂解液，并在室溫或4oC裂解4-5 min。對于鼠的血液，裂解4-5 min已經(jīng)足夠，對于人的外周血，宜延長裂解時間至10 min，但通常不宜超過15 min，并且裂解過程中宜適當(dāng)偶爾搖動以促進(jìn)紅細(xì)胞裂解。后續(xù)步驟相同。