糜胰蛋白酶背景^[1-3]

糜胰蛋白酶是糜蛋白酶和胰蛋白酶的混合晶體，具有兩種酶的性質(zhì)。水解酪蛋白的活力與糜蛋白酶相當(dāng)，水解苯甲酰酪氨酸乙酯的活力相當(dāng)于糜蛋白酶的3倍，水解酯鍵的活力與胰蛋白酶相似。干燥情況下穩(wěn)定，液體狀態(tài)易失活，PH7—8時(shí)活性最強(qiáng)。

糜胰蛋白酶

糜蛋白酶又稱為胰凝乳蛋白酶（chymotrypsin），是一種典型的色氨酸（Trp）蛋白酶，脊椎動(dòng)物的消化酶，EC 3.421.1。是從牛（豬）的新鮮胰腺中提取分離出的肽鏈內(nèi)切酶。α-糜蛋白酶的一級(jí)結(jié)構(gòu)和立體結(jié)構(gòu)已被闡明，是由245個(gè)氨基酸殘基組成的單一肽鏈，分子中有5對(duì)二硫鍵。呈白色、微黃色結(jié)晶或無(wú)定形粉末，易溶于水，不溶于有機(jī)溶劑。相對(duì)分子質(zhì)量24000，最適PH8~9。干態(tài)穩(wěn)定，水溶液中會(huì)迅速失活，以PH3~4的水溶液為最穩(wěn)定。作用于蛋白質(zhì)時(shí)，優(yōu)先水解L-酪氨酸（L-Tyr)和L-苯丙氨酸(L-Phe)的羧基所形成的肽鍵。

而胰蛋白酶Trypsin(Parenzyme)為蛋白酶的一種，EC3.4.21.4。在脊椎動(dòng)物中，作為消化酶而起作用。在胰臟是作為酶的前體胰蛋白酶原而被合成的。作為胰液的成分而分泌，受腸激酶，或胰蛋白酶的限制分解成為活化胰蛋白酶，是肽鏈內(nèi)切酶，它能把多肽鏈中賴氨酸和精氨酸殘基中的羧基側(cè)切斷。它不僅起消化酶的作用，而且還能限制分解糜蛋白酶原、羧肽酶原、磷脂酶原等其它酶的前體，起活化作用。是特異性最強(qiáng)的蛋白酶，在決定蛋白質(zhì)的氨基酸排列中，它成為不可缺少的工具。

糜蛋白酶可用來(lái)治療各種炎癥如：對(duì)于慢性支氣管炎、支氣管哮喘、胃炎、宮頸炎、盆腔炎、化膿性中耳炎、角膜炎、前列腺炎、栓塞性靜肪炎、腦血栓形成等均有一定療效。對(duì)炎性水腫、血腫、術(shù)后粘連、潰瘍、血栓等也有一定療效。但是，注射時(shí)有局部刺激，可引起過(guò)敏反應(yīng)。口服時(shí)勿嚼碎，以免被胃蛋白酶破壞而失效。有嚴(yán)重肝功能障礙和血凝功能不正常者禁用。肌注，一日1～2次，每次5mg，以2ml苯甲醇注射液或生理鹽水溶解后注射，療程10～10日。用于預(yù)防或控制復(fù)發(fā)，每周注射2～3次，每次5mg，外用：以生理鹽水溶解后紗布浸濕外敷，或與抗生素軟膏拌勻后涂紗布上外敷，每日換藥1～2次。

糜胰蛋白酶生產(chǎn)方法^[4][5]

取將新鮮或冷凍鍺胰，解凍、洗凈并投入絞肉機(jī)絞碎，按照豬胰漿量加2倍量體積的硫酸溶液（0.125mol/L），攪拌均勻，攪拌下提取1h，調(diào)節(jié)PＨ３右左，于40放置過(guò)夜。次日，用雙層紗布過(guò)濾，濾渣用等體積冷硫酸溶液（0.125mol/L），重復(fù)提取1次，合并2次濾液，得提取液。

豬胰臟H{2SO4;pH3;40→提取提取液

分段鹽析在不斷攪拌下，將提取液中逐漸加入工業(yè)用硫酸銨一定量，使硫酸銨的飽和度達(dá)25%。再加少量活性白陶土一定量助濾，放置低溫處，1d后過(guò)濾，濾液再加硫酸銨（CP）同上操作，得復(fù)2次，收集25%～65%飽和度沉淀部分，得粗制濾餅。

提取液(NH4)2SO4→分段鹽析粗制濾餅

透析、鹽析將粗濾餅用3倍體積的冷蒸餾水溶解，在低溫下對(duì)pH5.5的乙酸緩沖液（0.01mol/L）透析，過(guò)濾，在清液加硫酸銨（CP）一定量，至硫酸銨飽和度達(dá)65%，將沉淀抽濾，得透析濾餅。

粗制濾餅pH5.5;醋酸緩沖液；(NH4)2SO4→透析；鹽析透析濾餅

鹽析、除雜質(zhì)將透析餅在3倍體積冷蒸餾水溶解，調(diào)節(jié)pH3～3.5，加硫酸銨（CP）一定量，至硫酸銨飽和度達(dá)25%，室溫下放置3～5h后，用0.5%活性炭助濾，得澄清濾液。然后在不斷攪拌下，將100ml的澄清濾液緩慢加入預(yù)熱至250左右的乙醇10ml（乙醇濃度達(dá)10%），在室溫下放置3h后過(guò)濾，得澄清濾液。

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