BCA 法蛋白含量測定試劑盒說明書
分光光度法 50 管/48 樣
正式測定之前選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義:
樣品可溶性蛋白質含量常常用于酶活性計算。此外,可溶性蛋白質含量也用于食品等質量分析。
測定原理:
堿性條件下,蛋白質中半胱氨酸、胱氨酸、色氨酸、酪氨酸以及肽鍵,能將 Cu 2+還原成 Cu +;2 分子 的 BCA 與 Cu +結合,生成紫色絡合物,在 540-595nm 有吸收峰,562nm 處吸收峰最強。
自備儀器和用品:
臺式離心機、恒溫水浴鍋、可見分光光度計、移液器、1 ml 玻璃比色皿和蒸餾水
樣品中可溶性蛋白質提?。?/span>
1、液體樣品:
澄清無色液體樣品可以直接測定。。
2、組織樣品:
按照組織質量(g):提取液體積(ml)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入 1ml 提取液(自備,根據需要選用酶提取緩沖液或者蒸餾水或者生理鹽水) 冰浴勻漿,8000g,4℃離心 10min,取上清,即待測液。
3 、細菌、真菌:按照細胞數(shù)量(10 4個):
細菌、細胞:按照細胞數(shù)量(10 4個):提取液體積(ml) 為 500~1000:1 的比例(建議 500 萬細胞加入 1ml 提取液),冰浴超聲波破碎細胞(功率 300w,超聲 3 秒,間隔 7 秒,總時間 3min);然后 8000g,4℃,離心 10min,取上清置于冰上待測。
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