BCA法蛋白濃度測定試劑盒
一、產品簡介。
BCA 法蛋白濃度測定試劑盒是目前測定蛋白濃度的常用試劑，含有 BCA（bicinchonininc acid）的 A 液與含有二價銅離子 B 液混合，即成為蘋果綠的 BCA 工作液。加入含有蛋白質的樣品后，工作液中的 BCA 與蛋白質結合后，蛋白質將 Cu2+還原為 Cu+，工作液由原來的綠色變成紫色，在 562nm 處具有吸收峰，且光吸收值與蛋白質濃度成正比。因此，可以通過測定工作液的光吸收值來計算樣品中的蛋白濃度。
二、運輸與存儲條件。
本產品低溫運輸，各組份依據保存條件分開保存，有效期 12 個月。
三、特點與優(yōu)勢。
1. 靈敏度高。檢測濃度下限達到 10 μg/ml，最小檢測蛋白量達到 0.2 μg。
2. 抗干擾能力強。常用濃度的去垢劑，如 SDS，Triton X-100，Tween-20 不影響檢測結果。
四、自備試劑與耗材。
ddH2O，96 孔板等。
五、使用說明（96 孔板法）。
1. 配制 BCA 工作液。根據標準品和待測樣品數量，按照每個樣品需要200 μL工作液的標準計算工作液體積，并按照BCA-A液：BCA-B液=50:1的比例配制BCA工作液。
2. 將蛋白標準品用ddH2O稀釋50倍，配制成0.5 mg/mL。
3. 將稀釋的蛋白標準液加入96孔板孔中，體積分別為0、1、2、4、8、12、16、20 μl，并加入滅菌ddH2O補足體積到20 μl，對應的蛋白濃度分別為0、0.025、0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mg/ml。
4. 將待測樣品加入96孔板孔，并利用滅菌ddH2O補足體積到20 μl。每組樣品設置3個重復。
5. 各孔加入200 μl BCA工作液，振蕩混勻，37 oC孵育30 min，冷卻至室溫。
6. 用酶標儀測定562 nm處光吸收值（OD values），若無562 nm的濾光片，也可以測定540-595 nm波長的光密度值。
7. 根據標準曲線和樣品稀釋倍數計算蛋白濃度。
六、注意事項。
1. BCA法也可使用分光光度計測定，并根據比色皿的最小檢測體積，適當加大BCA工作液用量，標準品和待測樣品用量不變。
2. BCA法蛋白濃度測定試劑受螯合劑(EDTA，EGTA)、還原劑（DTT，巰基乙醇）、尿素、蔗糖和脂類的影響，應保證蛋白樣品中不含有以上試劑。
3. BCA工作液與樣品混合后，可以37 ℃孵育30 min，也可以室溫放置2 h。
4. BCA法測定蛋白濃度時，工作液顏色會隨著孵育時間的延長不斷加深。并且顯色反應會因溫度升高而加快。如果樣品中的蛋白濃度較低，可適當延長孵育時間。
關鍵字： BCA法蛋白濃度測定試劑盒;BCA;
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