總膽固醇（total cholesterol，TC）含量測定試劑盒說明書

                                                  分光光度法 50管/48樣

正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定                                             

測定意義：

TC包括游離膽固醇和膽固醇酯。TC是指組織中所有脂蛋白所含膽固醇之總和。

測定原理：

利用酯酶催化膽固醇酯水解生成游離膽固醇（FC）和游離脂肪酸（FFA），從而把膽固醇酯轉(zhuǎn)化為FC；進一步利用膽固醇氧化酶催化FC氧化，生成△4-膽甾烯酮和H2O2；最后利用過氧化物酶催化H2O2氧化4-氨基安替比林和酚，生成紅色醌類化合物；在500nm有特征吸收峰，其顏色深淺與TC含量成正比。

組成：

TC標準品：液體1ml×1支，0.5μmol/ml，4℃保存。

自備儀器和用品：

可見分光光度計、水浴鍋、可調(diào)式移液槍、1ml玻璃比色皿、異丙醇和蒸餾水。

TC的提?。?/span>

1、組織中TC的提?。喊凑战M織質(zhì)量（g）：試劑一體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml試劑一）進行冰浴勻漿，8000xg 4℃離心10min，取上清，即TC待測液。

2、細胞、細菌中TC的提?。合仁占?00-500萬細胞或細菌到離心管內(nèi)，棄上清，加1ml試劑一，超聲波破碎1min（強度20％，超聲2s，停1s），即TC待測液。

3、血清（漿）等樣品：直接測定。

測定操作：

1. 分光光度計預(yù)熱30 min，調(diào)節(jié)波長到500 nm，蒸餾水調(diào)零。

2. TC工作液的配制：臨用前，吸取約0.8ml試劑二分別加入試劑三和試劑四瓶中，充分溶解后再全部轉(zhuǎn)移回試劑二瓶中，充分混勻，TC工作液置于37℃水浴10min。用不完的工作液4℃保存一周。

3. 標準管：依次在1ml玻璃比色皿中加入100μl TC標準液和900μl TC工作液，混勻，37℃靜置3h后于500nm測定A標準管。

4. 測定管：依次在1ml玻璃比色皿中加入100μl TC待測液和900μl TC工作液，混勻，37℃靜置3h后于500nm測定A測定管。

5. 空白管：依次在1ml玻璃比色皿中加入100μl 試劑一和900μl TC工作液，混勻，37℃靜置3h后于500nm測定A測定管。

注意：標準管和空白管只需測定一次。

計算公式：

1. 血清（漿）中TC含量：

TC（μ mol /dL）= C標準液×（A測定管-A空白管）÷（A標準管-A空白管）×100

= 50×（A測定管-A空白管）÷（A標準管-A空白管）

C標準液：0.5μmol/ml；100 ml：1dL=100 ml。

2. 組織中TC含量：

(1)按樣本蛋白濃度計算

TC（μ mol/mg prot）= C標準液×（A測定管-A空白管）÷（A標準管-A空白管）÷Cpr

   = 0.5×（A測定管-A空白管）÷（A標準管-A空白管）÷Cpr

(2)按樣本質(zhì)量計算

TC（μ mol / g鮮重）= C標準液×（A測定管-A空白管）÷（A標準管-A空白管）÷W

= 0.5×（A測定管-A空白管）÷（A標準管-A空白管）÷W

C標準液：0.5μmol/ml；樣本蛋白濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g/ml

3. 細胞、細菌中TC含量：

TC（μ mol /104 cell）= C標準液×（A測定管-A空白管）÷（A標準管-A空白管）÷細菌或細胞（104 cell /L）= 0.5×（A測定管-A空白管）÷（A標準管-A空白管）÷細菌或細胞（104 cell /L）

C標準液：0.5μmol/ml。

注意事項：

最低檢出限為1nmol/ml。