RNA,作為遺傳信息的核心載體,蘊藏著生命活動的終極密碼。在精準(zhǔn)醫(yī)療和基因科技蓬勃發(fā)展的今天,高效、可靠的RNA提取技術(shù)已成為科研突破的關(guān)鍵基石。
從經(jīng)典有機溶劑法到智能化磁珠技術(shù),RNA提取領(lǐng)域正經(jīng)歷著革命性變革。新一代技術(shù)不僅突破傳統(tǒng)方法在純度、得率方面的局限,更實現(xiàn)了從微量樣本到高通量檢測的全方位覆蓋。無論是腫瘤研究的單細(xì)胞測序,還是傳染病的快速篩查,優(yōu)質(zhì)的RNA提取都是確保數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性的第一道防線。
在這場解碼生命的科學(xué)征程中,RNA提取技術(shù)的每一次進(jìn)步,都在為人類探索生命奧秘打開新的可能。選擇最適配的提取方案,就是為您的科研發(fā)現(xiàn)保駕護航。
RNA提取方法對比
步驟 |
酚氯仿法 |
鹽析法 |
玻璃珠法 |
離心柱法 |
磁珠法 |
1. 裂解
Trizol(苯酚/胍鹽)
SDS+蛋白酶K
玻璃珠+裂解液
胍鹽裂解液
離液鹽裂解
2. 去雜質(zhì)
氯仿離心分層
高鹽沉淀
酚氯仿抽提
過柱棄流穿液
磁珠棄上清
3. 分離
異丙醇沉淀
LiCl沉淀RNA
取上清
硅膠膜吸附
磁珠復(fù)合物
4. 洗滌
75%乙醇
70%乙醇
乙醇洗滌
乙醇洗柱
PEG洗磁珠
5. 洗脫
DEPC水
DEPC水
DEPC水
無RNase水
低鹽緩沖液
6. DNase
額外添加
額外添加
額外添加
柱上消化
磁珠消化
耗時
2-3小時
1.5-2小時
2-3小時
30-60分鐘
20-40分鐘
優(yōu)勢
成本低
耐抑制劑
破壁強
操作簡
高通量
缺點
苯酚有毒
鹽殘留
RNA剪切
成本高
設(shè)備貴
適用樣本
動物組織
植物/酵母
細(xì)菌/真菌
細(xì)胞/血液
病毒篩查
酚氯仿法
原理:利用 苯酚-氯仿 變性蛋白質(zhì),使RNA保留在水相,再通過異丙醇沉淀。
品名 |
CAS |
貨號 |
Trizol total RNA extraction reagent
三唑 總RNA提取試劑
/
Phenol, 99%, AR
苯酚
108-95-2
Isopropanol, 99.7%, AR
異丙醇
67-63-0
Anhydrous ethanol, 99.7%, AR
無水乙醇
64-17-5
Glycogen, from oyster
糖原
9005-79-2
2-Mercaptoethanol, 99%, for electrophoresis and molecular biology
2-巰基乙醇
60-24-2
Proteinase K, for bio, 30-40U/mg
蛋白酶 K
39450-01-6
Deoxyribonuclease I, from bovine pancreas, ≥2000 Kunitz U/mg
脫氧核糖核酸酶 I
9003-98-9
鹽析法
原理:高鹽(如LiCl、NaCl)選擇性沉淀RNA,去除DNA和蛋白質(zhì)。
品名 |
CAS |
貨號 |
Dodecyl sodium sulfate, 99%, for ion pair chromatography
十二烷基硫酸鈉
151-21-3
Sodium acetate, 99%, reagent grade, anhydrous
醋酸鈉
127-09-3
Lithium chloride, 99%, for synthesis
氯化鋰
7447-41-8
Proteinase K, for molecular biology, 30 U/mg
蛋白酶 K
39450-01-6
Glycogen, from oyster
糖原
9005-79-2
Guanidine thiocyanate, 97%, for bio
硫氰酸胍
593-84-0
Benzoic acid, 99.5%, AR
苯甲酸
65-85-0
玻璃珠法
原理:玻璃珠震蕩破碎細(xì)胞壁,釋放RNA,再結(jié)合酚氯仿或柱純化。
品名 |
CAS |
貨號 |
Glass-Fiber Wool
玻璃纖維
65997-17-3
Zirconium(IV) oxide, 99%
氧化鋯(IV)
1314-23-4
總蛋白提取細(xì)胞裂解緩沖液
總蛋白提取細(xì)胞裂解緩沖液
/
溶壁酶 來源于藤黃節(jié)桿菌
溶壁酶 來源于藤黃節(jié)桿菌
37340-57-1
Lysozyme, from chicken egg, ≥20,000 units/mg
溶菌酶
12650-88-3
Proteinase K, for bio, 30-40U/mg
蛋白酶 K
39450-01-6
RNA Sample preservation solution
RNA樣品保存液
/
Deoxyribonuclease I, from bovine pancreas, ≥2000 Kunitz U/mg
脫氧核糖核酸酶 I
9003-98-9
TRIzol LS Reagent
TRIzol LS Reagent
/
Glycogen, from oyster
糖原
9005-79-2
離心柱法
原理:RNA在高鹽條件下結(jié)合硅膠膜,洗滌后低鹽洗脫。
品名 |
CAS |
貨號 |
Guanidine carbonate salt, 99%
碳酸胍鹽
593-85-1
Ethanol, 95%, AR
乙醇
64-17-5
Guanidine thiocyanate
異硫氰酸胍
593-84-0
Lithium chloride, 99%, for synthesis
氯化鋰
7447-41-8
Isopropanol, 99.7%, AR
異丙醇
67-63-0
Proteinase K, for bio, 30-40U/mg
蛋白酶 K
39450-01-6
Deoxyribonuclease I, from bovine pancreas, ≥2000 Kunitz U/mg
脫氧核糖核酸酶 I
9003-98-9
Ammonium sulfate, 99%, AR
硫酸銨
7783-20-2
磁珠法
原理:磁珠表面包被硅基或特異性配體,選擇性結(jié)合RNA,磁場分離。
品名 |
CAS |
貨號 |
Beads MagCOOH, 10mg/mL, 2.8μm
羧基磁珠
/
Beads MagNH2, 10mg/mL, 500nm
氨基磁珠
/
Silica magnetic beads, 1.2µm, 50mg/mL
硅基磁珠
14808-60-7
Beads Streptavidin, 10 mg/mL, 2 μm
鏈霉親和素磁珠
/
Guanidine thiocyanate, 97%, for bio
硫氰酸胍
593-84-0
Proteinase K, for bio, 30-40U/mg
蛋白酶 K
39450-01-6
Deoxyribonuclease I, from bovine pancreas, ≥2000 Kunitz U/mg
脫氧核糖核酸酶 I
9003-98-9
Water, HPLC grade
水
7732-18-5
Poly(ethylene glycol), reagent grade, average Mn 1500
聚乙二醇
25322-68-3
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