堿裂解法作為分子生物學領域的經典技術，自誕生以來便以其高效、可靠的特性成為質粒DNA提取的黃金標準。這項技術的科學精髓在于巧妙利用DNA分子在不同pH環(huán)境下的特性差異：在堿性條件下，細菌細胞壁被破壞，染色體DNA與蛋白質發(fā)生不可逆變性的同時，環(huán)狀質粒DNA因其獨特的超螺旋結構得以保持完整。
步驟 |
操作細節(jié) |
主要試劑/耗材 |
純度/規(guī)格要求 |
細菌培養(yǎng)
37℃振蕩培養(yǎng)12-16小時（含抗生素）
菌體收集
離心（4℃, 12,000 rpm, 1 min）
離心管（聚丙烯）
無菌，DNase/RNase-free
菌體重懸
加入Solution I（含RNase A），渦旋混勻
Solution I
現配現用
細胞裂解
加入Solution II，輕柔顛倒混勻（冰?。?/div>
Solution II
現配現用
中和沉淀
加入Solution III，冰浴5分鐘，離心取上清
Solution III
預冷至4℃
雜質去除
可選：苯酚-氯仿抽提或柱純化
苯酚:氯仿:異戊醇（25:24:1）
硅膠膜純化柱（如Qiagen）
DNA洗滌
70%乙醇洗滌，離心后晾干
70%乙醇（DEPC水配制）
無RNase污染
DNA溶解
溶于TE緩沖液或ddH?O
TE緩沖液（pH 8.0）
DNase-free
核心產品
品名 |
CAS |
貨號 |
Ampicillin sodium salt
氨芐青霉素鈉
69-52-3
Centrifuge tubes, 1.5 mL, amber, low retention, 500 tubes/pack
離心管
/
Phenol, 99%, AR
苯酚
108-95-2
3-Methyl-1-butanol, 99%, SuperDry, water≤30 ppm, J&KSeal
3-甲基-1-丁醇
123-51-3
Anhydrous ethanol, 99.7%, AR
無水乙醇
64-17-5
Isopropanol, 99.7%, AR
異丙醇
67-63-0
Ethanol, 99.7%, for analysis
乙醇
64-17-5
Agarose, Electrophoresis Grade
瓊脂糖
9012-36-6
Ethidium bromide, 95%, for bio
溴化乙啶
1239-45-8
裂解試劑
品名 |
CAS |
貨號 |
D-(+)-Glucose, 99%, for bio
D-(+)-葡萄糖
50-99-7
Tris(hydroxymethyl)aminomethane, 99.5%, for analysis
三(羥甲基)氨基甲烷
77-86-1
Ethylenediaminetetraacetic acid, 99%, reagent grade
乙二胺四乙酸
60-00-4
Sodium hydroxide, 96%, AR flaky
氫氧化鈉
1310-73-2
Dodecyl sodium sulfate, 99%, for ion pair chromatography
十二烷基硫酸鈉
151-21-3
Potassium acetate, 99%, reagent grade
乙酸鉀
127-08-2
Acetic acid, 99.5%, AR
乙酸
64-19-7
純化增強試劑
品名 |
CAS |
貨號 |
Phenol, 99%, AR
苯酚
108-95-2
Chloroform-d, 99.8 atom%D, contains 0.03% v/v TMS
氘代氯仿
865-49-6
Proteinase K, for bio, 30-40U/mg
蛋白酶 K
39450-01-6
Ribonuclease A, ≥50 Kunitz units/mg
核糖核酸酶 A
9001-99-4
緩沖液與儲存液
品名 |
CAS |
貨號 |
Tris(hydroxymethyl)aminomethane, 99.5%, for bio
三(羥甲基)氨基甲烷
77-86-1
Ethylenediaminetetraacetic acid, 99%, reagent grade
乙二胺四乙酸
60-00-4
0.1mol/L PBS phosphate buffer solution
0.1mol/L PBS磷酸鹽緩沖液
/
Diethyl pyrocarbonate, 97%, for bio
焦碳酸二乙酯
1609-47-8
相關產品
品名 |
CAS |
貨號 |
Lysozyme, from chicken egg, ≥20,000 units/mg
溶菌酶
12650-88-3
Triton X-114
曲拉通 X-114
9036-19-5
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