人胚腎細(xì)胞293T
一. 細(xì)胞起源
293T細(xì)胞源于人胚胎腎細(xì)胞，經(jīng)腺病毒5（Ad5）DNA片段轉(zhuǎn)化獲得，并穩(wěn)定表達(dá)SV40大T抗原（SV40 large T antigen），使其支持含有SV40復(fù)制起點(diǎn)的質(zhì)粒高效復(fù)制[1]。
二. 生物學(xué)特性
1. 形態(tài)與生長特性
2. 遺傳與分子特性
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SV40大T抗原：增強(qiáng)外源基因表達(dá)效率，促進(jìn)質(zhì)粒復(fù)制[1]。
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干細(xì)胞樣表型：在無血清三維球體培養(yǎng)中，高表達(dá)ALDH1、CD44+/CD24-標(biāo)志物，并上調(diào)β-catenin、Notch1等干細(xì)胞信號(hào)通路[3]。
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間充質(zhì)轉(zhuǎn)化傾向：三維培養(yǎng)時(shí)表達(dá)波形蛋白（vimentin）、Zeb1等間充質(zhì)基因，可能增強(qiáng)轉(zhuǎn)移潛能[3]。
3. 代謝與毒性響應(yīng)
三. 培養(yǎng)與儲(chǔ)存
1. 培養(yǎng)基：DMEM＋10% FBS＋1% P/S[2]。
2. 傳代與凍存：常規(guī)胰酶消化傳代；30%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+60%FBS+10%DMSO，液氮保存[2]。
3. 轉(zhuǎn)染兼容性：脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染效率高（如GFP載體轉(zhuǎn)染成功率50–60%）[7][8]。
四. 研究應(yīng)用領(lǐng)域
1. 基因功能與調(diào)控研究
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RNA干擾（RNAi）：廣泛用于基因沉默（如p21WAF1/CIP1、PES1、HPIP基因），驗(yàn)證靶基因功能[9][10][11]。
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啟動(dòng)子活性分析：如尼羅羅非魚β-actin啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)EGFP表達(dá)[8]。
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蛋白互作研究：通過免疫共沉淀篩選互作蛋白（如C14orf166與RS8/EFCB/NRAP）[12]。
2. 疾病機(jī)制模型
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腫瘤研究：模擬癌干細(xì)胞表型，用于放療抗性、轉(zhuǎn)移機(jī)制探索[3]。
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代謝疾病：研究AMPK-脂聯(lián)素通路（女貞苷激活A(yù)MPK）[4]。
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病毒感染：構(gòu)建禽流感HA-GFP融合蛋白，分析信號(hào)肽對(duì)表達(dá)的影響[7]。
3. 藥物篩選與載體開發(fā)
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抗腫瘤藥物：評(píng)估化合物選擇性（如共軛亞油酸抑制EC109癌細(xì)胞）[5]。
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基因載體：殼聚糖納米粒轉(zhuǎn)染pGFP，但存在細(xì)胞毒性[6]。
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慢病毒包裝：HPIP siRNA慢病毒抑制HeLa/HepG2增殖[10]。
五. 近年研究進(jìn)展
1. 自噬調(diào)控：弓形蟲ROP17蛋白在293T中表達(dá)，促進(jìn)血清饑餓誘導(dǎo)的自噬（LC3-II↑、P62↓）[13]。
2. 神經(jīng)退行性疾?。?/strong>帕金森研究中用于驗(yàn)證Parkin蛋白調(diào)控小膠質(zhì)細(xì)胞NLRP3炎癥體[14]。
3. 新型基因工具：構(gòu)建雙標(biāo)簽載體（如pcDNA3.1-Flag-His）用于蛋白互作組學(xué)研究[12]。
六. 局限性與克服方法
1. 局限性
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遺傳不穩(wěn)定性：長期傳代可能累積突變，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果可重復(fù)性。
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非完全正常細(xì)胞：表達(dá)SV40抗原及間充質(zhì)基因，不完全代表原代腎細(xì)胞[3]。
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轉(zhuǎn)染毒性：殼聚糖納米粒等載體導(dǎo)致細(xì)胞損傷（抑制率>26%）[6]。
2. 克服方法
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低代次使用：限制傳代次數(shù)（<50代），定期鑒定細(xì)胞身份。
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替代載體：優(yōu)化脂質(zhì)體或病毒載體（如慢病毒）降低毒性[10]。
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三維培養(yǎng)模型：利用球體培養(yǎng)模擬體內(nèi)微環(huán)境，提升生理相關(guān)性[3]。
七. 總結(jié)與展望
293T細(xì)胞因其高轉(zhuǎn)染效率、快速增殖及SV40大T抗原特性，已成為分子生物學(xué)和疾病研究的核心工具。近年研究拓展至自噬、神經(jīng)退行性疾病及新型基因編輯領(lǐng)域。未來方向包括：
1. 精準(zhǔn)基因編輯：結(jié)合CRISPR-Cas9構(gòu)建更復(fù)雜疾病模型。
2. 類器官整合：聯(lián)合3D培養(yǎng)技術(shù)模擬器官微環(huán)境。
3. 毒性機(jī)制優(yōu)化：開發(fā)低毒載體（如肽納米粒）提升轉(zhuǎn)染安全性。
參考文獻(xiàn)
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2. 人胚腎細(xì)胞293T 說明書.武漢恩璣生命科技有限公司.
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6. 王紅梅, 等. 殼聚糖納米?；蜉d體的制備和體外轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)研究. 2010.
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11. 李杰萍, 等.利用不同方法檢測RNAi抑制人pescadillo基因的表達(dá)[J].細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志,2007.
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13. 劉宏延, 等. 弓形蟲ROP17真核表達(dá)載體的構(gòu)建及ROP17參與自噬的研究. 2012.
14. Parkin regulates microglial NLRP3 and represses neurodegeneration in Parkinson's disease. Yan YQ, et al. Research. 2025.