大鼠主動脈平滑肌細(xì)胞（A7R5）

一、細(xì)胞來源

1. 胚胎發(fā)育來源：A7R5細(xì)胞系源自新生大鼠胸主動脈，屬于平滑肌細(xì)胞譜系，表達(dá)神經(jīng)干細(xì)胞標(biāo)志物（如Sox10、Sox17），提示其可能來源于內(nèi)膜干細(xì)胞[1]。

2. 分化特征：在胚胎發(fā)育早期（E9.5）即可在背主動脈檢測到calponin-h1表達(dá)，成年后該基因在靜息態(tài)細(xì)胞中持續(xù)表達(dá)，增殖時下調(diào)[2]。

二、生物學(xué)特性

1. 分子標(biāo)志物：

• 結(jié)構(gòu)蛋白：組成性表達(dá)α-肌動蛋白、肌球蛋白重鏈（MyHC）、鈣網(wǎng)蛋白[1]。

• 收縮調(diào)節(jié)蛋白：calponin-h1通過結(jié)合肌動蛋白調(diào)控收縮[2]。

2. 離子通道特性：

• 鈣信號：TRPC6通道是主要鈣內(nèi)流通路，介導(dǎo)鈣瞬變[3]；TRPC4/6異源多聚化調(diào)控鈉鈣交換體（NCX1）反轉(zhuǎn)[4]。

• 鈣敏感性：Norbormide通過促進(jìn)鈣內(nèi)流誘導(dǎo)大鼠小血管收縮[5]。

3. 增殖與遷移調(diào)控：

• 細(xì)胞周期：受PCNA、CyclinE1、Cdk2/p27調(diào)控[6]。

• 遷移相關(guān)蛋白：MMP-2/9參與細(xì)胞外基質(zhì)重塑[7]。

三、培養(yǎng)與儲存

1. 培養(yǎng)條件：

• 培養(yǎng)基：DMEM(含NaHCO3 1.5g/L)＋10% FBS＋1% P/S[8]，血清可誘導(dǎo)增殖[9]。

• 凍存：30%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+60%FBS+10%DMSO，液氮保存（-196℃）[8]。

2. 模型構(gòu)建：

• 動脈粥樣硬化模型：75 mg/L ox-LDL處理24小時誘導(dǎo)增殖[7]。

四、研究應(yīng)用領(lǐng)域

1. 心血管疾病機(jī)制研究：

• 動脈粥樣硬化：研究脂質(zhì)代謝、炎癥因子（如IL-8/PHB1）及斑塊穩(wěn)定性[10]。

• 高血壓：探討TRPC3通道介導(dǎo)的血管舒縮功能障礙[11]。

2. 藥物篩選平臺：

• 天然化合物：燈盞乙素、丹參酮ⅡA、白藜蘆醇等抑制異常增殖[6][12][9]。

• 靶向抑制劑：ROCK抑制劑（如ITRI-E-212）調(diào)節(jié)pMLC磷酸化[13]。

五、近五年研究進(jìn)展（2020-2025）

1. 信號通路新機(jī)制：

• 燈盞乙素通過下調(diào)CD40/CD40L/TRAF6/NF-κB通路抑制ox-LDL誘導(dǎo)的遷移[7]。

• 白藜蘆醇調(diào)控miR-21-5p/PDCD4軸阻斷增殖與遷移[12]。

• 糖尿病血管病變：PKCδ通過促進(jìn)VSMC遷移加劇糖尿病性動脈粥樣硬化[14]。

2. 單萜類化合物：

• 香芹酚（Carvacrol）抑制ROS/p38 MAPK通路[15]。

• 百里醌（Thymoquinone）激活A(yù)MPK/PPARγ通路抑制MMP-2[15]。

六、局限性與克服方法

1. 局限性：

• 表型漂移：長期傳代后收縮蛋白表達(dá)丟失，喪失收縮功能[1]。

• 種屬特異性：TRPC通道組成（TRPC6高表達(dá)）與人類VSMC存在差異[3][4]。

2. 優(yōu)化策略：

• 3D共培養(yǎng)：與內(nèi)皮細(xì)胞共培養(yǎng)模擬血管壁微環(huán)境[14]。

• 基因編輯：CRISPR-Cas9敲入人源化離子通道基因[11]。

七、總結(jié)與展望

A7R5細(xì)胞系是研究血管平滑肌生理病理的關(guān)鍵模型，尤其在藥物機(jī)制篩選方面價值顯著。未來需結(jié)合類器官、單細(xì)胞測序技術(shù)深化其分子調(diào)控網(wǎng)絡(luò)研究，并推動跨物種比較以提升臨床轉(zhuǎn)化價值。

參考文獻(xiàn)

1. Embryonic rat vascular smooth muscle cells revisited - a model for neonatal, neointimal SMC or differentiated vascular stem cells? Kennedy E, et al. Vasc Pharmacol. 2014;60(3):79-87. [PMID: 24486364]

2. Developmental Pattern of Expression and Genomic Organization of the Calponin-h1 Gene. Samaha FF, et al. J Biol Chem. 1996;271(1):395-406. [PMID: 8537376]

3. Role of Endogenous TRPC6 Channels in Ca2+ Signal Generation in A7r5 Smooth Muscle Cells. Soboloff J, et al. J Biol Chem. 2005;280(45). [PMID: 16272151]

4. TRPC6 and TRPC4 Heteromultimerization Mediates Store Depletion-Activated NCX1 Reversal in Proliferative Vascular Smooth Muscle Cells. Zhang B, et al. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 2018;38.

5. Vasorelaxant properties of norbormide. Bova S, et al. Br J Pharmacol. 1996;117(6):1151-1155.

6. 楊艷. 燈盞乙素對VSMC細(xì)胞周期及增殖相關(guān)蛋白的調(diào)控作用. 中國藥理學(xué)通報. 2022;38(5).

7. 楊永兆. 燈盞乙素對ox-LDL誘導(dǎo)的血管平滑肌細(xì)胞增殖和遷移的調(diào)控作用研究. 碩士學(xué)位論文. 2022.

8. 大鼠主動脈平滑肌細(xì)胞（A7R5）說明書. 武漢恩璣生命科技有限公司.

9. 李欣,等. 丹參酮ⅡA抑制大鼠血管平滑肌細(xì)胞增殖及其機(jī)制研究. 中國藥理學(xué)通報. 2008;24(9).

10. 胡曉艷,等. Prohibitin1對動脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展及分子機(jī)制的探究. 中國動脈硬化雜志. 2019;27(10).

11. 吳昀. 葛根素通過TRPC3調(diào)控自發(fā)性高血壓大鼠主動脈舒縮功能的機(jī)制研究. 博士學(xué)位論文. 2020.

12. 吳昀. 葛根素通過TRPC3調(diào)控自發(fā)性高血壓大鼠主動脈舒縮功能的機(jī)制研究. 博士學(xué)位論文. 2020.

13. A Highly Selective Rho-Kinase Inhibitor (ITRI-E-212) Potentially Treats Glaucoma Upon Topical Administration With Low Incidence of Ocular Hyperemia. Hsu CR, et al. Invest Ophthalmol Vis Sci. 2019;60(2).

14. PKCδ regulates the vascular biology in diabetic atherosclerosis. Qin P, et al. Cardiovasc Diabetol. 2023;22:316.

15. Natural Monoterpenes as Potential Therapeutic Agents against Atherosclerosis. Yang J, et al. Int J Mol Sci. 2023;24(3).