背景^[1-3]

狂犬病毒(RV)核酸檢測試劑盒(熒光-PCR法)適用于檢測的犬腦組織、唾液等標(biāo)本中狂犬病毒RNA，適用于狂犬病毒感染的輔助診斷。

狂犬病是由狂犬病病毒（Rabies Virus,RV）引起的一種急性、接觸性人獸共患傳染病。病原為彈狀病毒科狂犬病毒屬RNA病毒。該病主要是通過被患病或帶毒的動物咬傷傳染所致，其病死率高達(dá)100%。

狂犬病毒(RV)核酸檢測試劑盒(熒光-PCR法)

檢驗(yàn)原理

狂犬病毒(RV)核酸檢測試劑盒(熒光-PCR法)根據(jù)狂犬病毒基因組設(shè)計(jì)特異性引物和熒光探針[1-2]，用一步法熒光RT-PCR技術(shù)對狂犬病毒RNA進(jìn)行體外擴(kuò)增檢測，用于臨床上對可疑感染者的病原學(xué)診斷。

標(biāo)本采集

對大動物（如犬、貓、牛等）腦組織標(biāo)本的采集使用快速采樣法，即用塑料管從頭部枕骨大孔或能看見腦組織的位置向眼眶處斜插（或用粗穿刺針從眼角眶向頭部枕骨大孔處斜插），然后阻斷塑料管尾部與外界大氣壓強(qiáng)連通，迅速將塑料管拔出。盡量使塑料管通過大腦、中腦和小腦部位。取出的塑料管中應(yīng)有腦組織；將腦組織標(biāo)本放入無菌離心管中。

唾液：用唾液采集器或棉拭子收集唾液于無菌離心管中。

應(yīng)用^[4][5]

狂犬病毒(RV)核酸檢測試劑盒(熒光-PCR法)可以用于新疆狂犬病病毒流行病學(xué)調(diào)查及基因組和N-G蛋白預(yù)測分析

研究以新疆阿勒泰地區(qū)疑似狂犬病的3份羊腦組織與溫宿、察布查爾縣、吉木乃縣、哈巴河縣四個地區(qū)各獸醫(yī)站送檢49份犬腦組織為實(shí)驗(yàn)材料，以直接免疫熒光檢測（DFA）、狂犬病毒(RV)核酸檢測試劑盒(熒光-PCR法)擴(kuò)增狂犬病病毒（RV）特異性目的基因（N基因）和XJALT-2012-1毒株全基因組序列測定進(jìn)行病毒檢測。以DNAStar-Lasergene.v7.1軟件拼接所測定的序列，應(yīng)用BLAST軟件分析N基因的遺傳進(jìn)化關(guān)系。

結(jié)果顯示本研究檢測結(jié)果為狂犬病毒陽性且獲得了該XJALT-2012-1毒株全基因序列。新疆XJALT-2012-1毒株基因組序列全長11923bp，與GenBank公布的其它RV基因組構(gòu)成基本一致。全基因組主要結(jié)構(gòu)蛋白的編碼順序及大小為：3'-N（1353bp）－P(894bp)－M（609bp）－G（1575bp）－L（6387bp）-5'。在結(jié)構(gòu)蛋白基因之間的間隔區(qū)大小各為N-P為2bp、P-M為5bp、M-G為5bp、G-L為423bp。通過XJALT-2012-1毒株的5個基因遺傳進(jìn)化樹、5個基因及其氨基酸序列的變異頻率圖和5個氨基酸序列的疏水性分析。表明該XJALT-2012-1毒株與狂犬病病毒基因Ⅰ型俄羅斯C群的遺傳關(guān)系最近，屬于同一進(jìn)化分支。應(yīng)用分子生物信息學(xué)軟件BioEdit對XJALT-2012-1毒株的核（N）蛋白與糖（G）蛋白氨基酸序列B細(xì)胞抗原表位的優(yōu)勢區(qū)域預(yù)測。結(jié)果表明：羊RV的G蛋白氨基酸第200、203、204變異位點(diǎn)與狂犬病病毒的毒力相關(guān)；核（N）蛋白氨基酸序列的430-437與糖（G）蛋白序列的130-138、191-201、505-520區(qū)域及其附近最有可能是B淋巴細(xì)胞抗原表位的優(yōu)勢區(qū)域。

參考文獻(xiàn)

[1]Phylogenetic analysis of nucleoprotein gene of dog rabies virus isolates from Southern India[J].T.Nagarajan;;S.B.Nagendrakumar;;B.Mohanasubramanian;;S.Rajalakshmi;;N.R.Hanumantha;;R.Ramya;;D.Thiagarajan;;V.A.Srinivasan.Infection,Genetics and Evolution,2009(5)

[2]Molecular characterization of Rabies Virus isolates from dogs and crab-eating foxes in Northeastern Brazil[J]..Virus Research,2009(1)

[3]A retrospective study of rabies in humans in Zimbabwe,between 1992 and 2003[J].D.M.Pfukenyi;;D.Pawandiwa;;P.V.Makaya;;Unesu Ushewokunze-Obatolu.Acta Tropica,2007(3)

[4]Molecular epidemiology of rabies in Colombia 1994–2005 based on partial nucleoprotein gene sequences[J].Andrés Páez;;Andrés Velasco-Villa;;Gloria Rey;;Charles E.Rupprecht.Virus Research,2007(1)

[5]陳繼章.新疆狂犬病病毒流行病學(xué)調(diào)查及基因組和N-G蛋白預(yù)測分析[D].新疆農(nóng)業(yè)大學(xué),2014.