背景技術(shù)

阿司帕坦作為強甜味劑廣泛應(yīng)用于口服藥物制劑、飲料和食品，為無毒物質(zhì)。但是，應(yīng)該注意，阿司帕坦可能產(chǎn)生具有潛在毒性的代謝物甲醇，天冬氨酸和苯丙氨酸。其中， 只有苯丙氨酸在阿司帕坦的正常攝取水平上產(chǎn)生的量較大，應(yīng)加以關(guān)注?，F(xiàn)有技術(shù)研究表明，在合成阿司帕坦的過程中，不可避免會生成一些雜質(zhì)，其中就包括5-芐基-3，6-二氧-2-哌嗪乙酸。

因為最終要施用到人體上，因此本領(lǐng)域?qū)刂扑幬镌系馁|(zhì)量控制有著非常嚴(yán)苛的要求，其中就包括控制藥用輔料的質(zhì)量。如前所述，阿司帕坦作為常用的藥用輔料，檢測其中雜質(zhì)的含量對控制其質(zhì)量有著重要的意義?，F(xiàn)有技術(shù)中（如中國藥典2020版四部）并沒有披露具體的方法，因此，如何檢測阿司帕坦中5-芐基-3，6-二氧-2-哌嗪乙酸的含量是一個亟待解決的技術(shù)難題。

測定方法

采用高效液相色譜法：

稀釋液：體積比為9:1的水?甲醇溶液； 流動相：稱取56g磷酸二氫鉀，置容量瓶中，加820mL水溶解，用磷酸調(diào)節(jié)pH值至4.3，加甲醇稀釋至刻度，搖勻； 標(biāo)準(zhǔn)品溶液：取5?芐基?3 ,6?二氧?2?哌嗪乙酸標(biāo)準(zhǔn)品，加稀釋液溶解并定量稀釋制成每1mL含75μg的溶液； 供試品溶液：取阿司帕坦50mg，精密稱定，置10mL量瓶中，加稀釋液溶解并稀釋至刻度，搖勻；

色譜系統(tǒng)：用46mm×25cm，填充擔(dān)體L1的色譜柱；檢測波長為210nm；流速為2mL/min；柱溫40℃；

系統(tǒng)適應(yīng)性：取標(biāo)準(zhǔn)品溶液20uL，注入液相色譜儀，記錄色譜峰：拖尾因子應(yīng)不大于2.0，重復(fù)進(jìn)樣相對標(biāo)準(zhǔn)偏差不大于4.0%；

測定法：取標(biāo)準(zhǔn)品溶液與供試品溶液各20μL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖并測量主峰響應(yīng)值，按下式計算阿司帕坦中5?芐基?3,6?二氧?2?哌嗪乙酸的百分含量：含量= (ru/rs)×(Cs/Cu)×100，式中Cs為標(biāo)準(zhǔn)品溶液中5?芐基3,6?二氧?2?哌嗪乙酸的濃度，單 位為mg/mL；Cu為供試品溶液中阿司帕坦的濃度，單位為mg/mL；ru與rs為5-芐基-3，6-二氧-2-哌嗪乙酸在供試溶液與標(biāo)準(zhǔn)溶液中的峰面積。

參考文獻(xiàn)

[1]揚州一洋制藥有限公司. 一種測定阿司帕坦中5-芐基-3,6-二氧-2-哌嗪乙酸含量的方法:CN202011551493.X[P]. 2021-04-20.