HEPES是用于生物研究的常用通用緩沖液之一，主要成分是羥乙基哌嗪乙硫磺酸，外觀為白色結(jié)晶粉末。在生理pH下，該分子是兩性離子的，并在pH 6.8至8.2下可有效作為緩沖劑。HEPES廣泛應(yīng)用于多種生物化學(xué)反應(yīng)，并在某些細(xì)胞培養(yǎng)基中用作緩沖試劑。

配制方法

①　HEPES緩沖液可按需要的濃度立即添加到配置的培養(yǎng)液中，再過濾除菌。每1000ml培養(yǎng)液中添加2.38克HEPES，待溶后用1N NaOH調(diào)pH至7.2，濾過除菌后應(yīng)用，這時(shí)HEPES的應(yīng)用濃度為10mmol/L。

②　也可以配出100x貯存液（1mol/L），應(yīng)用前取99ml培養(yǎng)液添加1ml貯存液，最后運(yùn)用濃度仍為10mmol/L。1mol/L（100x）HEPES緩沖液配置方式：取23.8gHEPES溶解90ml雙蒸水中，用1N NaOH調(diào)pH至7.5-8.0，隨后用水滴定劑至100ml，過濾除菌，散裝瓶子（2ml/瓶），4攝氏度保存。可以根據(jù)實(shí)際情況的需求按照配比以同樣的方式配制緩沖液。

應(yīng)用

HEPES緩沖液，很多時(shí)候作為有機(jī)化工中的離子緩沖劑和醫(yī)藥中間體，也用于細(xì)胞的培養(yǎng)，這可延伸到體外受精和胚胎培養(yǎng)，因?yàn)樗姆纸饽芰呻S著溫度的升高而增強(qiáng)，隨著溫度的降低而減弱，但與其他緩沖劑相比，低溫時(shí)它可較好的保持酶的結(jié)構(gòu)和功能。

HEPES緩沖液暴露于光線中時(shí)，會產(chǎn)生過氧化氫，對培養(yǎng)的細(xì)胞或其它有生物活性的物體產(chǎn)生毒性，因此HEPES作為緩沖液的操作應(yīng)盡量在避光條件下進(jìn)行。