背景^[1-3]

營養(yǎng)瓊脂是一種常用的微生物培養(yǎng)基，主要用于一般細(xì)菌的培養(yǎng)。其成分主要包括蛋白胨、牛肉膏、氯化鈉以及瓊脂。這些成分提供了細(xì)菌生長所需的營養(yǎng)物質(zhì)。其中，蛋白胨和牛肉膏富含氮源、碳源以及多種維生素，是細(xì)菌生長的重要能量來源；氯化鈉則用于調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的滲透壓，使其接近細(xì)菌生長的自然環(huán)境；瓊脂則作為凝固劑，使培養(yǎng)基形成固體狀態(tài)，便于細(xì)菌在其表面生長并形成菌落。

營養(yǎng)瓊脂的制備過程相對簡單，主要是將各成分溶解于蒸餾水中，加熱溶解，然后校正pH值至適宜范圍，最后分裝、滅菌即可。根據(jù)使用目的的不同，瓊脂的用量也會有所調(diào)整。例如，用于菌落計(jì)數(shù)時(shí)，瓊脂量通常為1.5%；而用于制作平板或斜面時(shí)，瓊脂量則為2%。

此外，市場上也有現(xiàn)成的營養(yǎng)瓊脂藥品供應(yīng)，這些產(chǎn)品已經(jīng)調(diào)配好各成分的比例，并調(diào)整了pH值，用戶只需加水后即可直接制作培養(yǎng)基，無需自行配制。這為實(shí)驗(yàn)室工作提供了極大的便利。

營養(yǎng)瓊脂

營養(yǎng)瓊脂在微生物學(xué)、食品科學(xué)、醫(yī)藥等領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用。例如，在食品工業(yè)中，營養(yǎng)瓊脂可用于檢測食品中的微生物污染情況；在醫(yī)藥領(lǐng)域，它可用于細(xì)菌的培養(yǎng)和鑒定，為疾病的診斷和治療提供依據(jù)。

雖然營養(yǎng)瓊脂為細(xì)菌的生長提供了良好的環(huán)境，但并非所有細(xì)菌都能在其上生長。因此，在選擇培養(yǎng)基時(shí)，應(yīng)根據(jù)目標(biāo)細(xì)菌的特性進(jìn)行選擇。同時(shí)，制備和使用營養(yǎng)瓊脂時(shí)，也應(yīng)注意遵守實(shí)驗(yàn)室安全規(guī)范，避免交叉污染和其他安全問題。

應(yīng)用^[4-5]

營養(yǎng)瓊脂可以用于鐘山區(qū)雞沙門氏菌病病原分離及耐藥性研究

沙門氏菌病是一種人畜共患病,而且隨著抗菌藥物的濫用,沙門氏菌耐藥性越來越強(qiáng),使得該病的防控變得越來越復(fù)雜?；诹P水市鐘山區(qū)雞沙門氏菌病比較常見,且防控困難的現(xiàn)實(shí),本研究在對六盤水市鐘山區(qū)沙門氏菌病進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查的基礎(chǔ)上,開展了沙門氏菌的分離鑒定、藥敏試驗(yàn)、耐藥基因分析等研究。

1. 鐘山區(qū)雞沙門氏菌病流行病學(xué)調(diào)查及其病原菌分離與鑒定。本研究于2017年1月～2019年12月期間對兩種不同養(yǎng)殖方式的6個(gè)養(yǎng)雞場的雞群進(jìn)行定期采樣(每兩個(gè)月采集一次血清樣本),通過平板凝集試驗(yàn)檢測沙門氏菌特異性抗體;通過臨床癥狀觀察和系統(tǒng)的病理剖檢對發(fā)病雞進(jìn)行初步診斷,然后采集病雞的肝臟、脾臟、心臟組織樣本進(jìn)行沙門氏菌分離,分別使用普通營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、營養(yǎng)肉湯和麥康凱瓊脂固體培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng),觀察細(xì)菌生長狀態(tài);通過革蘭氏染色觀察細(xì)菌形態(tài);利用14種生化管對分離菌進(jìn)行生化特性鑒定;對3株分離菌的16S r DNA基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增、測序及遺傳進(jìn)化分析。平板凝集試驗(yàn)結(jié)果顯示,所調(diào)查的養(yǎng)雞場中沙門氏菌平均檢出率為22.3%,其中地面平養(yǎng)方式養(yǎng)雞場的平均檢出率為26.4%,籠養(yǎng)方式養(yǎng)雞場的平均檢出率為18.4%,可見地面平養(yǎng)雞群的沙門氏菌病相較籠養(yǎng)雞群更為嚴(yán)重。對發(fā)病雞的臨床診斷結(jié)果顯示,病雞精神萎頓,怕冷且不愿走動,羽毛松亂,翅下垂,腹瀉且糞便在泄殖腔周圍呈白色漿糊狀;剖檢可見其肝臟、脾臟等腫大充血,且脾臟表面有結(jié)節(jié),腹腔內(nèi)存在腹水,腸道炎癥等,其癥狀和剖檢病變與雞沙門氏菌病相符。

分離培養(yǎng)結(jié)果顯示,分離菌在普通營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上的菌落為直徑2～4mm,白色半透明、濕潤光滑、圓形且邊緣整齊,在麥康凱培養(yǎng)基上的菌落為無色透明、圓形隆起,均與沙門氏菌的培養(yǎng)特性一致。革蘭氏染色結(jié)果顯示,分離菌為大小均勻、兩端鈍圓、無莢膜、無芽孢的紅色短桿菌,符合典型的沙門氏菌革蘭氏染色特征。

參考文獻(xiàn)

[1]A Sensitive,Highly Specific Novel Isothermal Amplification Method Based on Single-Nucleotide Polymorphism for the Rapid Detection of Salmonella Pullorum.[J].Shen Haiyan;Wen Junping;Liao Xinmeng;Lin Qijie;Zhang Jianfeng;Chen Kaifeng;Wang Shaojun;Zhang Jianmin.Frontiers in microbiology,2020

[2]A reduced graphene oxide-titanium dioxide nanocomposite based electrochemical aptasensor for rapid and sensitive detection of Salmonella enterica[J].Shalini Muniandy;;Swe Jyan Teh;;Jimmy Nelson Appaturi;;Kwai Lin Thong;;Chin Wei Lai;;Fatimah Ibrahim;;Bey Fen Leo.Bioelectrochemistry,2019

[3]Detection of Salmonella from chicken rinsate with visible/near-infrared hyperspectral microscope imaging compared against RT-PCR[J].Matthew Eady;;Gayatri Setia;;Bosoon Park.Talanta,2019

[4]Molecular determination of H antigens of Salmonella by use of a microsphere-based liquid array.[J].McQuiston John R;;Waters R Jordan;;Dinsmore Blake A;;Mikoleit Matthew L;;Fields Patricia I.Journal of clinical microbiology,2011

[5]陳堯貴.鐘山區(qū)雞沙門氏菌病病原分離及耐藥性研究[D].貴州大學(xué),2022.