背景^[1-3]

SK-MEL-2人惡性黑色素瘤貼壁細(xì)胞系是人惡性黑色素瘤貼壁細(xì)胞系。它是一種腫瘤細(xì)胞，通常在體外培養(yǎng)用于研究黑色素瘤等腫瘤相關(guān)的生物學(xué)和病理學(xué)問題。

黑色素瘤是一種皮膚癌，通常與紫外線照射、遺傳因素和其他環(huán)境因素有關(guān)。SK-MEL-2細(xì)胞系被廣泛用于研究黑色素瘤的生物學(xué)特性、藥物篩選和治療等方面的研究。

在培養(yǎng)SK-MEL-2人惡性黑色素瘤貼壁細(xì)胞系時(shí)，通常需要在無菌條件下進(jìn)行操作，并使用適當(dāng)?shù)募?xì)胞培養(yǎng)基和添加劑來維持細(xì)胞的生長(zhǎng)和存活。細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境需要維持適當(dāng)?shù)臏囟取穸群蜌怏w環(huán)境，以保證細(xì)胞的正常生長(zhǎng)和分裂。

SK-MEL-2人惡性黑色素瘤貼壁細(xì)胞系

SK-MEL-2人惡性黑色素瘤貼壁細(xì)胞系培養(yǎng)操作

1)復(fù)蘇SK-MEL-2人惡性黑色素瘤貼壁細(xì)胞系：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。

將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2)SK-MEL-2人惡性黑色素瘤貼壁細(xì)胞系傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

b、加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

c、按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

d、將細(xì)胞懸液按1：2比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3)SK-MEL-2人惡性黑色素瘤貼壁細(xì)胞系凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例；

a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。

b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。

c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

應(yīng)用^[4-5]

SK-MEL-2人惡性黑色素瘤貼壁細(xì)胞系可以用于HSulf-1在黑素瘤中的表達(dá)及抑制腫瘤細(xì)胞遷移的作用

觀察人原代黑素細(xì)胞株HEMa和惡性黑素瘤細(xì)胞株A375、Malme-3M、SK-MEL-2人惡性黑色素瘤貼壁細(xì)胞系、SK-MEL-5、SK-MEL-28、M14、MV3中HSulf-1的表達(dá)及其意義。

方法：以人原代黑素細(xì)胞株HEMa作為對(duì)照,應(yīng)用Real-time PCR和Western blot方法檢測(cè)人惡性黑素瘤細(xì)胞系中HSulf-1蛋白和mRNA的表達(dá)。結(jié)果：在HSulf-1mRNA和蛋白表達(dá)水平上,正常黑色素細(xì)胞株、低轉(zhuǎn)移性惡性黑素瘤細(xì)胞株高于轉(zhuǎn)移性惡性黑素瘤細(xì)胞株。結(jié)論：HSulf-1在轉(zhuǎn)移性黑素瘤的發(fā)生發(fā)展過程中可能發(fā)揮了抑制轉(zhuǎn)移作用。

在黑素瘤細(xì)胞株中過表達(dá)HSulf-1目的：為了研究HSulf-1在黑素瘤發(fā)生發(fā)展過程中所起的作用,在黑素瘤細(xì)胞株中過表達(dá):HSulf-1。

方法：將HSulf-1基因穩(wěn)定表達(dá)載體pcDNA3.1/Myc-His(-)-HSulf-1質(zhì)粒用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法導(dǎo)入HSulf-1低表達(dá)的黑素瘤細(xì)胞MV3,用Western blot方法檢測(cè)轉(zhuǎn)染后人惡性黑素瘤細(xì)胞株MV3中HSulf-1在蛋白水平表達(dá)的改變,Real-time PCR方法檢測(cè)人惡性黑素瘤細(xì)胞株MV3中HSulf-1在mRNA水平HSulf-1表達(dá)的改變。

結(jié)果：同對(duì)照相比,轉(zhuǎn)染HSulf-1基因穩(wěn)定表達(dá)載體的黑素瘤細(xì)胞株在HSulf-1蛋白、mRNA水平升高。

結(jié)論：黑素瘤細(xì)胞株成功過表達(dá)HSulf-1。

HSulf-1對(duì)惡性黑素瘤細(xì)胞生物學(xué)特性的影響目的：研究HSulf-1在黑素瘤發(fā)生發(fā)展過程中對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖及遷移能力的影響。

方法：在HSulf-1過表達(dá)的黑素瘤細(xì)胞株,用Western blot方法檢測(cè)HSulf-1在惡性黑色素瘤發(fā)生發(fā)展過程中對(duì)腫瘤細(xì)胞HGF信號(hào)通路的作用；用MTT法檢測(cè)各組細(xì)胞生長(zhǎng)與增殖能力的差異；用細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組細(xì)胞遷移能力的差異。

結(jié)果：在HSulf-1穩(wěn)定表達(dá)的惡性黑素瘤細(xì)胞株MV3中,ERK的磷酸化激活效應(yīng)減弱,但可能不是由HGF信號(hào)通路介導(dǎo)；過表達(dá)HSulf-1的惡性黑素瘤細(xì)胞株MV3的遷移能力低于對(duì)照組；且在該細(xì)胞株中,HSulf-1對(duì)細(xì)胞的增殖能力的影響與對(duì)照組相比無明顯差異。

結(jié)論：推測(cè)HSulf-1可能參與降低惡性黑素瘤細(xì)胞株的遷移能力,從而抑制腫瘤的轉(zhuǎn)移。

參考文獻(xiàn)

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