背景^[1-3]

兔子宮成纖維細(xì)胞是一種常用的細(xì)胞系，用于研究女性生殖系統(tǒng)的發(fā)育和生理功能。該細(xì)胞來源于雌性未受精的兔子子宮內(nèi)膜組織，經(jīng)過體外培養(yǎng)、增殖和分化而成。

兔子宮成纖維細(xì)胞

兔子宮成纖維細(xì)胞分離自子宮組織，是疏松結(jié)締組織的主要細(xì)胞成分，由胚胎時期的間充質(zhì)細(xì)胞分化而來。其特點(diǎn)如下：

形態(tài)：成纖維細(xì)胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu)，其細(xì)胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯。

功能：成纖維細(xì)胞功能活動旺盛，細(xì)胞質(zhì)嗜弱堿性，具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動，在一定條件下，它可以實現(xiàn)跟纖維細(xì)胞的互相轉(zhuǎn)化。它對不同程度的細(xì)胞變性、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用。

體外培養(yǎng)特性：剛分離的子宮成纖維細(xì)胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中。細(xì)胞融合后，會彼此連接成網(wǎng)狀，細(xì)胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。

主要特征：它是子宮的重要細(xì)胞組成，在體外易于培養(yǎng)；在子宮損傷后能修復(fù)和重塑子宮；在子宮炎癥時能有效控制炎癥擴(kuò)散。

兔子宮成纖維細(xì)胞操作規(guī)程:

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:

1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。

2)兔子宮成纖維細(xì)胞培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3)兔子宮成纖維細(xì)胞凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。

二.兔子宮成纖維細(xì)胞處理:

1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。*天換液并檢查細(xì)胞密度。

2)兔子宮成纖維細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。產(chǎn)品僅供科研使用

對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:

收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

應(yīng)用^[4][5]

兔子宮成纖維細(xì)胞可以用于PGE2和IL1-β對體外培養(yǎng)兔子宮韌帶成纖維細(xì)胞增殖的影響

通過體外培養(yǎng)兔子宮韌帶成纖維細(xì)胞,研究前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)和白細(xì)胞介素1-β(interleukin1-β,IL1-β)二者在單一和聯(lián)合應(yīng)用時,對體外培養(yǎng)的兔子宮成纖維細(xì)胞的增殖有何種影響。

研究方法1利用組織塊法體外培養(yǎng)兔子宮韌帶成纖維細(xì)胞,并通過形態(tài)學(xué)及免疫組化測定其Ⅰ、Ⅲ膠原蛋白含量對其進(jìn)行鑒定。

2用不同濃度的炎癥因子PGE2(25、50、100、500、1000ng/m1)和IL1-β(10、20、50、100、200ng/ml)刺激細(xì)胞增殖,以常規(guī)培養(yǎng)組為對照,通過MTT法對炎癥因子對細(xì)胞增殖的作用進(jìn)行測定。

3應(yīng)用Excel2003錄入數(shù)據(jù),以均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)的形式來表示各組數(shù)據(jù)的平均灰度值,采用SPSS16.0軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)分的統(tǒng)計分析。采用單因素方差分析法和LSD-t檢驗法分析各組間資料,檢驗水準(zhǔn)：α=0.05。

結(jié)果：1利用組織塊法成功在體外培養(yǎng)兔子宮韌帶成纖維細(xì)胞,該細(xì)胞的外在形態(tài)與典型的成纖維細(xì)胞形態(tài)相似,符合成纖維細(xì)胞的形態(tài)學(xué)特征,采用免疫組化方法測定該細(xì)胞中Ⅰ、Ⅲ型膠原蛋白的表達(dá),其結(jié)果符合韌帶細(xì)胞的特性。

2單獨(dú)應(yīng)用時,100ng/ml的PGE2和20ng/ml的IL1-β分別為各自最有效的促增殖濃度(P<0.05)；將濃度為100ng/ml的PGE2(?)(?)20ng/ml的IL1-β聯(lián)合應(yīng)用以刺激子宮韌帶成纖維細(xì)胞的增殖,該條件下的韌帶成纖維細(xì)胞增殖活性高于單因子濃度作用組(P<0.05)。高于各自最適濃度后,PGE2和IL1-p的促增殖作用不再與其濃度成正相關(guān)性。

結(jié)論：PGE2與IL1-β在適當(dāng)濃度內(nèi)單獨(dú)或聯(lián)合應(yīng)用,均能有效的對體外培養(yǎng)的子宮韌帶成纖維細(xì)胞的增殖起到促進(jìn)作用,但這種作用并不時刻與炎癥因子的濃度成正相關(guān)性。

參考文獻(xiàn)

[1]Activated T-cells and pro-inflammatory cytokines differentially regulate prostaglandin E2 secretion by mesenchymal stem cells..Biochemical and Biophysical Research Communications,2012

[2]Prostaglandin E2(PGE2)in Portal Blood in Patients with Pancreatic Tumor—A Single Institution Series.Piotr Hogendorf;;Adam Durczyński;;Anna Kumor;;Janusz Strzelczyk.Journal of Investigative Surgery,2012

[3]Anorectal symptoms before and after laparoscopic sacrocolpoperineopexy for pelvic organ prolapse..International Urogynecology Journal,2012

[4]Pelvic organ prolapse and collagen-associated disorders.Karin Lammers;;Sabrina L.Lince;;Marian A.Spath;;Léon C.L.T.Kempen;;Jan C.M.Hendriks;;Mark E.Vierhout;;Kirsten B.Kluivers.International Urogynecology Journal,2012

[5]白楊.PGE2和IL1-β對體外培養(yǎng)兔子宮韌帶成纖維細(xì)胞增殖的影響[D].鄭州大學(xué),2012.