背景^[1-3]

重組人乳鐵蛋白是一種生物活性蛋白，具有與鐵離子結(jié)合的能力，可以抑制鐵離子在腸道內(nèi)的吸收，從而抑制腸道內(nèi)細(xì)菌的生長(zhǎng)，同時(shí)還可以促進(jìn)免疫細(xì)胞的活性，增強(qiáng)免疫力。

重組人乳鐵蛋白可以用于制作嬰幼兒配方奶粉、孕婦奶粉、醫(yī)用配方食品等，以及作為食品添加劑、營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑等。由于其具有高活性和高純度，重組人乳鐵蛋白已成為嬰幼兒配方奶粉中的重要添加成分。

此外，重組人乳鐵蛋白還可以用于制作乳鐵傳遞蛋白和乳鐵結(jié)合蛋白，這些蛋白質(zhì)具有良好的熱穩(wěn)定性和生物學(xué)活性，可廣泛應(yīng)用于食品、化妝品、醫(yī)療等領(lǐng)域。

重組人乳鐵蛋白

乳鐵蛋白（Lactoferrin，LF）也稱為乳轉(zhuǎn)鐵蛋白，是一種鐵結(jié)合蛋白，與鐵離子的親和力很高，是轉(zhuǎn)鐵蛋白的250～300倍。每個(gè)LF都能可逆的結(jié)合兩個(gè)鐵離子，將鐵離子轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞中，控制血液和分泌液中游離鐵離子的濃度。

乳鐵蛋白在初乳和牛奶中含量高，在眼淚、唾液、精液、鼻和支氣管分泌物、膽汁和胃腸液等粘膜分泌物中的含量較低。此外，乳鐵蛋白是先天防御系統(tǒng)的關(guān)鍵組成成分，其多種細(xì)菌、真菌、酵母、病毒和寄生蟲(chóng)表現(xiàn)出強(qiáng)大的抗菌活性，因此它還具有抗炎和抗癌活性，并具有多種酶功能。

乳鐵蛋白在維持體內(nèi)細(xì)胞鐵水平中也起關(guān)鍵作用。因此LF作為抗氧化劑、免疫促進(jìn)劑、補(bǔ)鐵劑、藥物載體等，被廣泛用于化妝品、食品、動(dòng)物生產(chǎn)、醫(yī)療等領(lǐng)域中。本品是由水稻細(xì)胞表達(dá)并通過(guò)蛋白提純工藝而成。

重組人乳鐵蛋白使用方法：

1.使用1×PBS/超純水/生理鹽水（9g/L NaCl），復(fù)溶至濃度為0.1-1 mg/mL。2-8℃或室溫靜置，30 min內(nèi)可完全溶解。如需加快溶解，可上下輕輕顛倒離心管，直至凍干粉完全溶解。

2.將充分溶解的LF溶液，經(jīng)0.22μm濾膜無(wú)菌過(guò)濾，分裝后保存于2~8℃或-20℃。2~8℃，可穩(wěn)定保存3-6個(gè)月；如需長(zhǎng)期保存，建議置于-20℃。

應(yīng)用^[4][5]

重組人乳鐵蛋白可以用于重組人乳鐵蛋白抗宮頸癌作用的研究

目前治療宮頸癌大多采用化學(xué)合成藥物,在治療過(guò)程中易產(chǎn)生毒副作用和耐藥性。蛋白類藥物以其毒副作用低和不產(chǎn)生耐藥性等優(yōu)點(diǎn)已引起研究者的高度關(guān)注?；蛑委熞殉蔀榘┌Y治療領(lǐng)域中的研究熱點(diǎn)。

人乳鐵蛋白(human lactoferrin,hLTF)是一種隸屬于鐵結(jié)合蛋白家族的糖基化蛋白。它具有多種生理功能,如抑菌;抗病毒感染作用;調(diào)節(jié)體內(nèi)鐵的平衡;促進(jìn)鐵的傳遞和吸收;調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能;增強(qiáng)機(jī)體抗病能力等作用。

研究利用復(fù)制缺陷型腺病毒介導(dǎo)人乳鐵蛋白基因,經(jīng)過(guò)擴(kuò)增,純化之后通過(guò)體內(nèi)外試驗(yàn)對(duì)Ad-hLTF抗宮頸癌活性及其作用機(jī)理進(jìn)行了研究,獲得如下結(jié)果:

(1) 重組人乳鐵蛋白腺病毒(Ad-hLTF)和含綠色熒光蛋白的腺病毒(Ad-GFP)通過(guò)腺病毒純化試劑盒純化后病毒滴度分別達(dá)到1.6×1011pfu/ml和1.45×1011pfu/ml。

(2) 外源性乳鐵蛋白基因經(jīng)腺病毒載體成功轉(zhuǎn)入Hela細(xì)胞,當(dāng)感染復(fù)數(shù)MOI=100時(shí),體外轉(zhuǎn)染效率達(dá)到90%以上。

(3) western blot方法檢出外源性乳鐵蛋白的高表達(dá),與Ad-GFP組和空白對(duì)照組相比差異顯著有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

(4) Ad-hLTF能顯著抑制Hela細(xì)胞生長(zhǎng),與分別時(shí)間和劑量呈正比。

(5) Ad-hLTF可誘導(dǎo)Hela細(xì)胞凋亡及細(xì)胞周期Gl期阻滯,與Ad-GFP組和空白對(duì)照組比較有顯著差異性(P<0.05)。

(6) 體內(nèi)試驗(yàn)結(jié)果顯示Ad-hLTF組小鼠移植瘤生長(zhǎng)速度遠(yuǎn)小于Ad-GFP組和空白對(duì)照組。

(7) 免疫組化結(jié)果顯示,Ad-hLTF組可顯著抑制p53表達(dá),上調(diào)p19ARF的表達(dá)。

試驗(yàn)從體內(nèi)體外兩部分研究Ad-hLTF抗宮頸癌的作用,并從蛋白表達(dá)探討了其誘導(dǎo)腫瘤凋亡的機(jī)理,為開(kāi)發(fā)Ad-hLTF作為治療宮頸癌的手段之一提供了理論依據(jù)。

參考文獻(xiàn)

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[5]吳國(guó)芳.重組人乳鐵蛋白抗宮頸癌作用的研究[D].西北農(nóng)林科技大學(xué),2011.