背景^[1-3]

梅毒甲苯胺紅不加熱血清試驗診斷試劑用性病實驗室玻片試驗（VDRL）抗原重懸于含有甲苯胺紅的特制溶液中制成，檢測人血清或血漿中的反應(yīng)素，用于臨床輔助診斷梅毒。

基本原理:用正常牛心肌的心類脂（Cardiolipin二磷酸酰甘油衍生物）作為抗原，而不是用螺旋體作為抗原，來測定病人血清中的反應(yīng)素（非特異性抗體---抗心磷脂抗體）。用來初步篩查梅毒螺旋體感染。反應(yīng)素在初期梅毒病灶出現(xiàn)后1~2周就可測出，在二期梅毒滴度最高，三期梅毒較低。

梅毒甲苯胺紅不加熱血清試驗診斷試劑

梅毒是一種由梅毒螺旋體(TP)引起全身各器官的性傳播疾病，當(dāng)梅毒螺旋體進入人體3~6周后，可在患者血清中檢出2種抗體，一種是針對螺旋體抗原的抗體，另一種是針對非螺旋體抗原的抗體。臨床梅毒檢測常用的血清學(xué)試驗分為非梅毒螺旋體抗原試驗(如VDRL,TRUST,RPR)和梅毒螺旋體抗原試驗(如TPPA,ELISA等)。

梅毒螺旋體感染人體后，宿主迅速對螺旋體表面的脂質(zhì)作出免疫應(yīng)答，在3~4周產(chǎn)生抗類脂質(zhì)抗原的抗體（反應(yīng)素），此時TRUST試驗可呈陽性。

TRUST法適用于梅毒篩查，其定量試驗可作為療效評價，但風(fēng)濕、紅斑狼瘡患者可與之發(fā)生交叉反應(yīng)。

TP-ELISA雙抗原夾心法敏感性高于TRUST,RPR法，價格低，且操作簡單方便，儀器操作規(guī)范，便于資料保存，適用于樣本量大的體檢及流行病學(xué)的調(diào)查。

TPPA方法特異性好，適用于梅毒篩查后陽性標本的確證，不宜作為梅毒篩查及療效判斷。WHO推薦用VDRL和RPR法對血清進行過篩試驗，出現(xiàn)陽性者用TPPA,TPHA等方法做確證試驗。

RPR法和TRUST法存在不同程度的假陽性，從醫(yī)療單位避免醫(yī)療糾紛和患者減少心理壓力及家庭矛盾兩方面考慮，標本的檢測采用ELISA和TRUST雙法篩查，陽性標本再用TPPA方法進行生物學(xué)假陽性甄別。

應(yīng)用^[4][5]

用于HIV感染者梅毒篩查流程及梅毒螺旋體膜蛋白Tp47對HIV經(jīng)生殖道感染影響的研究

為評價不同的梅毒篩查流程對HIV感染者梅毒血清檢測陽性率的影響,我們根據(jù)樣本量計算公式N=Zα2P（1-P）/δ2,結(jié)合HIV感染患者梅毒大致流行率及3%誤差和95%的置信區(qū)間,估算一共至少需要677份樣本。

收集了865例HIV感染者血清,對每個樣本同時進行梅毒甲苯胺紅加熱血清診斷試驗（TRUST）、梅毒螺旋體血凝試驗（TPPA）和酶聯(lián)免疫法檢測梅毒螺旋體抗體試驗（TP-ELISA）,按照三種不同的篩查流程分別計算梅毒血清檢測陽性率,將結(jié)果進行McNemar’s檢驗分析。

結(jié)果表明,865例樣本中,反向篩查流程的梅毒血清檢測陽性率為24.9%,傳統(tǒng)篩查流程的陽性檢出率為14.2%,兩者之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.0001）;反向篩查流程與ECDC篩查流程的總符合率為99.8%。

目前梅毒檢測過程中,存在血清固定、在感染初期尚未出現(xiàn)抗體導(dǎo)致假陰性等問題。為了建立一種用于檢測梅毒抗原的方法以早期、便捷輔助診斷梅毒,本研究制備了抗梅毒螺旋體膜蛋白Tp47單克隆抗體。

首先利用基因重組技術(shù)表達、純化TP47蛋白,將其免疫BALA/c小鼠,采用雜交瘤融合技術(shù)獲得了5株抗Tp47蛋白的單抗。1E2B4株為IgG2a型,其余四株均為IgGI型,其中1E2B4株抗體效價最高,經(jīng)ELISA測定達1:4x105。經(jīng)Western Blot、免疫共沉淀實驗鑒定,5株抗體對靶抗原識別具有良好的特異性。利用1B3F2株和1E2B4株初步建立了ELISA、膠體金試紙條的方法檢測重組Tp47蛋白,其中ELISA的靈敏度為6ng/ml,特異性好,具有潛在的臨床應(yīng)用價值。

為了探索梅毒螺旋體感染對HIV經(jīng)生殖道感染的影響及相關(guān)機制,利用梅毒螺旋體主要的膜蛋白Tp47刺激宮頸內(nèi)膜細胞End1/E6E7來模擬梅毒螺旋體對HIV在生殖道黏膜傳播的影響。經(jīng)Tp47蛋白刺激后,End1/E6E7細胞在蛋白、mRNA水平上均有IL-6、IL-8表達升高（p<0.05）,同時增加了HIV感染后細胞內(nèi)病毒抗原水平（p<0.05）。

HIV感染經(jīng)Tp47預(yù)處理的End1/E6E7與單純感染病毒組相比,mRNA二代測序篩選出其上調(diào)的差異基因涉及的生物學(xué)過程主要富集在“調(diào)節(jié)細胞因子合成”、“調(diào)節(jié)與免疫相關(guān)的細胞因子”、“細胞運動”、“蛋白進入”相關(guān),經(jīng)定量PCR驗證,轉(zhuǎn)錄組測序結(jié)果可信度高。

結(jié)論:（1）在HIV感染者中建議采用反向或者ECDC篩查流程來篩查梅毒,傳統(tǒng)篩查流程可能嚴重低估HIV感染者的梅毒血清檢測陽性率。

（2）本研究制備的抗Tp47單克隆抗體能敏感且特異地識別Tp47蛋白,利用自主研發(fā)的抗Tp47單抗,初步建立了ELISA、膠體金試紙條檢測重組TP47蛋白,在梅毒抗原診斷方面具有潛在的應(yīng)用前景。

（3）梅毒螺旋體膜蛋白Tp47可能通過促進炎癥因子的表達來增強HIV經(jīng)生殖道傳播。

參考文獻

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