背景[1-3]
人宮頸癌組織源細(xì)胞分離自人宮頸癌組織純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
宮頸癌是女性常見(jiàn)惡性腫瘤之一，由人類乳頭瘤病毒（HumanPapillomavirus，簡(jiǎn)稱HPV）引起的，按病理組織學(xué)主要分為腺癌、腺角化癌和鱗狀細(xì)胞癌。宮頸癌細(xì)胞呈上皮樣，貼壁生長(zhǎng)，具有無(wú)限增殖能力，喪失接觸抑制現(xiàn)象，癌細(xì)胞間粘著性減弱。此外，易于被凝集素凝集，細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)發(fā)生紊亂。
人宮頸癌組織源細(xì)胞
細(xì)胞分離方法：
1.將宮頸癌組織至于無(wú)菌的培養(yǎng)皿中用含雙抗的1×PBS（pH=7.4）清洗若干次至無(wú)明顯血細(xì)胞；
2.剪取宮頸癌組織邊緣微血管豐富的組織，用含雙抗的1×PBS（pH=7.4）清洗兩次；
3.將剪取的宮頸癌邊緣*成2-3mm3大小，加入含雙抗的1×PBS（pH=7.4）清洗；
4.用進(jìn)行過(guò)滅菌處理的玻璃滴管將剪碎的組織塊和清洗用的1×PBS（pH=7.4）一起轉(zhuǎn)入15ml離心管中；
5.250rpm/min離心2 min，小心傾去液體，再加入適量的含雙抗的1×PBS（pH=7.4），用玻璃滴管吹吸液體以清洗組織塊；
6.繼續(xù)250rpm/min離心2 min，小心傾去液體，重復(fù)上述步驟若干次，直至離心后的液體中觀察不到明顯的紅色；
7.將清洗好的組織塊重新轉(zhuǎn)至無(wú)菌的培養(yǎng)皿中，用無(wú)菌的200 ml的吸頭將組織塊貼于25cm2培養(yǎng)瓶中；
8.加入2ml培養(yǎng)基，將培養(yǎng)瓶倒置放于37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中2-3h之后正置培養(yǎng)瓶繼續(xù)培養(yǎng)；
9.培養(yǎng)若干天后，可觀察到組織塊周圍陸續(xù)有細(xì)胞爬出，繼續(xù)培養(yǎng)幾天，直至組織塊周圍的細(xì)胞達(dá)到較高密度（培養(yǎng)其間兩天換液一次，換液操作時(shí)動(dòng)作一定要輕柔，以防組織塊被搖下）；
10.當(dāng)組織塊附近的細(xì)胞生長(zhǎng)到較高密度后，將貼壁的組織塊吹下，換新的培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)24；
11.24h后，用0.25%的Trypsin-EDTA消化細(xì)胞，F(xiàn)BS中止消化，將消化后的細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)入15ml離心管，1000rpm/min離心5min，之后傾去廢液，用培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，轉(zhuǎn)入原來(lái)的培養(yǎng)瓶中，繼續(xù)在37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
應(yīng)用[4][5]
用于冬凌草甲素誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞死亡的機(jī)制研究
對(duì)冬凌草甲素體外抗腫瘤活性進(jìn)行了較為系統(tǒng)的研究，主要闡述了冬凌草甲素在三種腫瘤細(xì)胞：人黑色素瘤A375-82細(xì)胞，人宮頸癌HeLa細(xì)胞，小鼠纖維瘤L929細(xì)胞中誘導(dǎo)細(xì)胞死亡的不同機(jī)制。
在測(cè)定了三種來(lái)源血液的腫瘤細(xì)胞（人紅白血病細(xì)胞系，K562；人組織淋巴瘤細(xì)胞，U937；人早幼粒白血病細(xì)胞，HL-60）和人黑色素瘤細(xì)胞，A375-S2；人宮頸癌細(xì)胞，HeLa；人乳腺癌細(xì)胞，MCF-7；小鼠纖維肉瘤細(xì)胞，L929細(xì)胞毒時(shí)發(fā)現(xiàn)三種血液系統(tǒng)的瘤株均對(duì)冬凌草甲素敏感，半數(shù)抑制濃度分別為：IC50（K562）：16.2±1.2μmol/L，IC50（U937）：27.1±2.3/μmol/L，IC50（HL-60）：20.4±3.6μmol/L，另外三種人源細(xì)胞中以A375-S2細(xì)胞最敏感，IC50：15.1±1.2μmol/L，對(duì)其中鼠源細(xì)胞L929較敏感，IC50：35.6±4.2/μmol/L。
冬凌草甲素在對(duì)敏感細(xì)胞株有效濃度下作用于人外周血單核細(xì)胞（PBMC）12 h，沒(méi)有細(xì)胞毒作用，但隨著濃度的增加，對(duì)PBMCs具有較弱的細(xì)胞毒作用。
在A375-S2細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，Hoechst 33258熒光染色后證明34.3μmol/L冬凌草甲素作用細(xì)胞12 h時(shí)出現(xiàn)明顯的凋亡小體，DNA電泳則表明大劑量的冬凌草甲素（137.4μmol/L）作用細(xì)胞12 h時(shí)出現(xiàn)壞死特有的彌散泳帶。
采用流式細(xì)胞術(shù)及LDH活力測(cè)定進(jìn)一步證明冬凌草甲素誘導(dǎo)A375-S2細(xì)胞死亡是平衡于凋亡與壞死之間。合適劑量的冬凌草甲素誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。