4T1+luc小鼠乳腺癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記

 基本特性:

4T1 是從410.4瘤株中未經(jīng)誘變篩得的6-硫鳥嘌噙抗性細(xì)胞株。當(dāng)注射到BALB/c 小鼠中時(shí)，4T1自發(fā)產(chǎn)生高轉(zhuǎn)移腫瘤，可轉(zhuǎn)移到肺，肝，淋巴結(jié)和大腦，同時(shí)在注射部位形成始發(fā)灶。誘導(dǎo)轉(zhuǎn)移時(shí)不需要摘除始發(fā)灶。4T1細(xì)胞在BALB/c小鼠中的生長(zhǎng)與轉(zhuǎn)移特性與人體中的乳腺癌十分相近。這種腫瘤是人VI期乳腺癌的動(dòng)物模型。

4T1-誘導(dǎo)的腫瘤在手術(shù)后及未手術(shù)情況下轉(zhuǎn)移的動(dòng)力學(xué)相近，可以用作手術(shù)后及未手術(shù)模型。 跟其他腫瘤模型相比，由于4T1的抗6-硫鳥嘌噙特性，微小的轉(zhuǎn)移細(xì)胞團(tuán)(少到僅僅1個(gè))也可以在許多遠(yuǎn)端器官???

細(xì)胞系基礎(chǔ)信息

背景與構(gòu)建：

通過慢病毒或逆轉(zhuǎn)錄病毒轉(zhuǎn)染，將熒光素酶（Luciferaseluc）基因穩(wěn)定整合至4T1細(xì)胞基因組中，表達(dá)螢火蟲熒光素酶（Fireflluciferase）。

常用于活體成像技術(shù)（IVIS系統(tǒng)），實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)腫瘤生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移及治療響應(yīng)。

特性保留：

保留親本4T1細(xì)胞的高轉(zhuǎn)移性（肺、肝、骨轉(zhuǎn)移）和三陰性乳腺癌（TNBC）特征。

需驗(yàn)證標(biāo)記后細(xì)胞的增殖率、侵襲能力是否與野生型一致（避免基因插入影響表型）。

核心研究應(yīng)用

活體成像技術(shù)（BLI）：

步驟：

注射D-熒光素底物（15mg/kg，腹腔注射）。

10-15分鐘后通過IVIS系統(tǒng)檢測(cè)生物發(fā)光信號(hào)（單位：光子/秒/cm2/球面度）。

應(yīng)用場(chǎng)景：

原位移植后縱向監(jiān)測(cè)原發(fā)瘤和轉(zhuǎn)移灶（如肺轉(zhuǎn)移的早期檢測(cè)）。

評(píng)估免疫治療（如PD-1抗體）或化療藥物（紫杉醇）的抑瘤效果。

轉(zhuǎn)移機(jī)制研究：

通過熒光信號(hào)定量比較不同器官的轉(zhuǎn)移傾向（如CXCR4抑制劑對(duì)骨轉(zhuǎn)移的阻斷作用）。

實(shí)驗(yàn)關(guān)鍵注意事項(xiàng)

細(xì)胞培養(yǎng)：

培養(yǎng)基：RPMI-16410FB抗生素（如嘌呤霉素）（維持luc基因選擇壓力）。

定期檢測(cè)熒光素酶活性（如使用LuciferasAssaKit），避免信號(hào)衰減。

體內(nèi)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)：

小鼠品系：必須使用免疫健全的BALB/c小鼠（同源模型）。

熒光素底物：需避光保存，現(xiàn)配現(xiàn)用（溶解于PBS，過濾除菌）。

成像參數(shù)：曝光時(shí)間10-60秒，避免信號(hào)飽和或背景噪音。

公司出售的產(chǎn)品：

 注意事項(xiàng)：

污染防控：細(xì)菌污染：培養(yǎng)液渾濁、變黃，需添加抗生素（如青霉素-鏈霉素），污染嚴(yán)重時(shí)丟棄。

霉菌污染：顯微鏡下可見絲狀/絮狀漂浮物，需徹底消毒培養(yǎng)箱（過氧乙酸擦拭+紫外線照射），污染細(xì)胞立即丟棄。

支原體污染：無明顯外觀變化，需定期用PCR或熒光法檢測(cè)，污染后可用支原體清除試劑處理。

操作規(guī)范：收到細(xì)胞后，先檢查包裝完整性及干冰狀態(tài)，鏡檢細(xì)胞形態(tài)并拍照記錄（40x、100x、200x）。

未開封細(xì)胞若污染或活性差（3天內(nèi)反饋），可申請(qǐng)重發(fā)；客戶操作失誤導(dǎo)致問題不重發(fā)。

運(yùn)輸與保存：干冰運(yùn)輸：凍存管含1×10? cells，收到后立即轉(zhuǎn)入液氮或-80℃冰箱。

常溫運(yùn)輸：T25培養(yǎng)瓶，收到后靜置3-4小時(shí)穩(wěn)定狀態(tài)，再換液或傳代。