總抗氧化能力（DPPH法）試劑盒說明書
微量法100T/96S
注意：正式測定之前選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
測定意義：
測定對象中各種抗氧化物質(zhì)和抗氧化酶等構(gòu)成總抗氧化水平。在生物學(xué)、醫(yī)學(xué)和藥學(xué)研究中
常常檢測血漿、血清、唾液、尿液等各種體液，細(xì)胞或組織等裂解液、植物或中草藥抽提液及各種抗氧化物(antioxidant)溶液的總抗氧化能力。
測定原理：
DPPH·為穩(wěn)定的自由基 ，溶于甲醇，乙醇等極性溶劑中，在 515nm 處有最大吸收。向DPPH·溶液中加入抗氧化劑時(shí)，會發(fā)生脫色反應(yīng)，因此可用吸光度的變化并以 Trolox 作為對照體系量化抗氧化物質(zhì)的抗氧化能力。
組成：
產(chǎn)品名稱 | AO038-100T/96S | Storage |
提取液：液體 | 120ml | 4℃ |
試劑一：液體 | 45ml | 4℃避光 |
說明書 | 一份 |
提取液使用前需要預(yù)冷
自備儀器和用品：
酶標(biāo)儀、低溫臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、96孔板、恒溫水浴鍋、冰和蒸餾水。
樣品的制備：
血清、血漿、唾液或尿液等液體樣品
血漿（制備時(shí)可以使用肝素或檸檬酸鈉抗凝，不宜使用 EDTA 抗凝）4℃，5000rpm 離心10min，取上清待測。血清、唾液或尿液樣品直接用于測定，也可以-80℃凍存（不宜超過30 d）后再測定。
(2) 組織樣品
按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1ml提取液）進(jìn)行冰浴勻漿，然后 10000g，4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。
(3) 細(xì)胞樣品
按照細(xì)胞數(shù)量（104 個(gè)）：提取液體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細(xì)胞加入1ml 提取液），冰浴超聲波破碎（功率 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）；10000g，4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。
測定步驟：
酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至515nm。
樣本測定
試劑名稱（μl） | 空白管 | 測定管 |
提取液 | 20 |
|
樣品 |
| 20 |
試劑一 | 380 | 380 |
充分混勻，室溫避光反應(yīng) 20min，取 200μl 至 96 孔板測定 515nm 吸光值，△A= A 空白-A 測定 |
注意：
1.空白管只需測定一次，若 A 測定小于 0.2，需用提取液稀釋樣品后進(jìn)行檢測。
2.反應(yīng)結(jié)束后若溶液中存在絮狀沉淀，需要2000xg離心10min，取上清進(jìn)行檢測。
總抗氧化能力計(jì)算公式：
1、以自由基清除率表示：
DPPH 自由基清除率（％）=（A 空白-A 測定）÷A 空白×100％
2、以標(biāo)準(zhǔn)曲線上獲得的抗氧化劑 Trolox 的量表示：
標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 0.7072x - 0.0081 R2 = 0.9977 x:Trolox 濃度(μmol/ml)
y:吸光值差值△A
單位定義:用從標(biāo)準(zhǔn)曲線上獲得的抗氧化劑Trolox的量來表示樣本的DPPH自由基清除能力。
（1）按樣本質(zhì)量計(jì)算
總抗氧化能力（μmol Trolox/g 鮮重）=（△A+0.0081）÷0.7072×V 樣÷(V 樣÷V 樣總×W)
=1.414×（△A+0.0081）÷W
（2）按樣本蛋白濃度計(jì)算
總抗氧化能力（μmol Trolox/mg prot）=（△A+0.0081）÷0.7072×V 樣÷(V 樣÷V 樣總×Cpr)
=1.414×（△A+0.0081）÷Cpr
(3) 按細(xì)胞計(jì)算
總抗氧化能力（μmol Trolox/104cell）=（△A+0.0081）÷0.7072×V 樣÷（V 樣÷V 樣總×細(xì)胞數(shù)量（萬個(gè)）
= 1.414×（△A+0.0081）÷ 細(xì)胞數(shù)量（萬個(gè)）
（4）按液體體積計(jì)算
總抗氧化能力（μmol Trolox/ml）=（△A+0.0081）÷0.7072
=1.414×（△A+0.0081）
V 樣總：加入提取液體積，1 ml；V 樣：反應(yīng)中樣品體積，20μl；W：樣品質(zhì)量，g；Cpr：
樣本蛋白濃度，mg/ml
注意事項(xiàng)：
1. 盡量避免使用在酸性條件下呈紅色或接近紅色的試劑，否則對本試劑盒的檢測結(jié)果產(chǎn)生
干擾。
2. 樣品中不宜添加 Tween、Triton 和 NP-40 等去垢劑和 DTT、巰基乙醇等影響氧化還原反
應(yīng)的還原劑。
3. 若液體樣本為堿性，需要用提取液稀釋至酸性后再檢測。
關(guān)鍵字： 總抗氧化能力檢測試劑盒（DPPH法）;
伊勢久（江蘇連云港）生物科技有限責(zé)任公司，成立于2019年，坐落于新亞歐大陸橋東方橋頭堡連云港市。公司由資深行業(yè)專家和雙一流高校博士聯(lián)合創(chuàng)辦，主要從事生化檢測、病理檢測和原料酶等相關(guān)試劑的研發(fā)和生產(chǎn)。
我司位于聯(lián)東U谷科技創(chuàng)新谷內(nèi)的2000平米的生產(chǎn)、研發(fā)基地已建成投入運(yùn)行，其中包括150平米的超十萬級的潔凈車間。我司堅(jiān)持以自主研發(fā)為核心，現(xiàn)已生產(chǎn)出的脲酶、tRNA轉(zhuǎn)運(yùn)核糖核酸、刀豆球蛋白、胰蛋白酶抑制劑等產(chǎn)品，熱銷市場以來收到了客戶的廣泛好評。
公司秉承“ 摯誠科研、匠心傳承” 的發(fā)展理念，聚焦于前沿生物技術(shù)的應(yīng)用和創(chuàng)新，努力成為生物科技領(lǐng)域的標(biāo)桿企業(yè)。堅(jiān)持以客戶為中心，致力于為中國的科研工作者提供高品質(zhì)的產(chǎn)品和專業(yè)服務(wù)，始終是我們努力的目標(biāo)和方向。