總抗氧化能力（ABTS法）試劑盒說明書
微量法100T/96S
正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義：
測定對象中各種抗氧化物質(zhì)和抗氧化酶等構(gòu)成總抗氧化水平。在生物學(xué)、醫(yī)學(xué)和藥學(xué)研究中常常檢測血漿、血清、唾液、尿液等各種體液，細(xì)胞或組織等裂解液、植物或中草藥抽提液及各種抗氧化物(antioxidant)溶液的總抗氧化能力。
測定原理：
ABTS 法是使用最廣泛的間接檢測方法，可用于親水性和親脂性物質(zhì)抗氧化能力測定。ABTS經(jīng)氧化后生成穩(wěn)定的藍(lán)綠色陽離子自由基 ABTS+，能溶于水相或酸性乙醇介質(zhì)中，在 734nm處有最大吸收。被測物質(zhì)加入 ABTS+溶液后，所含抗氧化成分能與 ABTS+發(fā)生反應(yīng)而使反應(yīng)體系褪色。在 734nm 檢測吸光度的變化，并以 Trolox 作為對照體系量化抗氧化物質(zhì)的抗氧化能力。
組成：
產(chǎn)品名稱 | AO040-100T/96S | Storage |
提取液：液體 | 120ml | 4℃ |
試劑一：液體 | 24ml | 4℃避光 |
試劑二：粉劑 | 2瓶 | 4℃避光 |
說明書 | 一份 |
自備儀器和用品：
酶標(biāo)儀、低溫臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、恒溫水浴鍋、96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
樣品的制備：
(1) 血清、血漿、唾液或尿液等液體樣品
血漿（制備時可以使用肝素或檸檬酸鈉抗凝，不宜使用 EDTA 抗凝）4℃，5000rpm 離心10min，取上清待測。血清、唾液或尿液樣品直接用于測定，也可以-80℃凍存（不宜超過30 d）后再測定。
(2) 組織樣品
按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1ml提取液）進(jìn)行冰浴勻漿，然后 10000g，4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。
(3) 細(xì)胞樣品
按照細(xì)胞數(shù)量（104個）：提取液體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細(xì)胞加入1ml 提取液），冰浴超聲波破碎（功率 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）；10000g，4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。
測定步驟：
酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至734nm。
工作液的配置：臨用前取試劑二一瓶，加入 11ml 試劑一，震蕩混勻 20min 后，靜置， 取上清使用。（注意，現(xiàn)配現(xiàn)用）
樣本測定
試劑名稱（μl） | 空白管 | 測定管 |
樣品 |
| 10 |
提取液 | 10 |
|
工作液 | 190 | 190 |
充分混勻，測定 734nm 吸光值，△A= A 空白-A 測定 |
注意： 1.空白管只需測定一次，吸取工作液時不要吸到底部沉淀，若 A 測定小于 0.4，需用提取液對樣品進(jìn)行稀釋后檢測。 2.檢測時先將工作液加入96孔板中，之后加入提取液（空白）/樣品（測定），混合均勻后立即進(jìn)行檢測（時間應(yīng)盡量短）。 |
總抗氧化能力計算公式：
1、以自由基清除率表示：
ABTS 自由基清除率（％）=（A 空白-A 測定）÷A 空白×100％
2、以標(biāo)準(zhǔn)曲線上獲得的抗氧化劑 Trolox 的量表示：
標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 0.7021x - 0.0012 R2 = 0.9985 x:Trolox 濃度(μmol/mL)
y:吸光值差值△A
單位定義:以標(biāo)準(zhǔn)曲線上獲得的抗氧化劑 Trolox 的量來表示樣本的 ABTS 自由基清除能力。
（1）按樣本質(zhì)量計算
總抗氧化能力（μmol Trolox/g 鮮重）=（△A+0.0012）÷0.7021×V 樣÷(V 樣÷V 樣總×W)
=1.424×（△A+0.0012）÷W
（2）按樣本蛋白濃度計算
總抗氧化能力（μmol Trolox/mg prot）=（△A+0.0012）÷0.7021×V 樣÷(V 樣÷V 樣總×Cpr)
=1.424×（△A+0.0012）÷Cpr
（3）按細(xì)胞計算
總抗氧化能力（μmol Trolox/104cell）=（△A+0.0012）÷0.7021×V 樣÷（V 樣÷V 樣總×細(xì)胞數(shù)量（萬個））
= 1.424×（△A+0.0012）÷ 細(xì)胞數(shù)量（萬個）
（4）按液體體積計算
總抗氧化能力（μmol Trolox/ml）=（△A+0.0012）÷0.7021
=1.424×（△A+0.0012）
V 樣總：加入提取液體積，1 ml；V 樣：反應(yīng)中樣品體積，10μL；W：樣品質(zhì)量，g；
Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml
注意事項：
1. 盡量避免使用在中堿性條件下呈藍(lán)色或接近藍(lán)色的試劑，否則對本試劑盒的檢測結(jié)果產(chǎn)
生干擾。
2. 樣品中不宜添加 Tween、Triton 和 NP-40 等去垢劑和 DTT、巰基乙醇等影響氧化還原反
應(yīng)的還原劑。
關(guān)鍵字： 總抗氧化能力檢測試劑盒（ABTS法）;
伊勢久（江蘇連云港）生物科技有限責(zé)任公司，成立于2019年，坐落于新亞歐大陸橋東方橋頭堡連云港市。公司由資深行業(yè)專家和雙一流高校博士聯(lián)合創(chuàng)辦，主要從事生化檢測、病理檢測和原料酶等相關(guān)試劑的研發(fā)和生產(chǎn)。
我司位于聯(lián)東U谷科技創(chuàng)新谷內(nèi)的2000平米的生產(chǎn)、研發(fā)基地已建成投入運(yùn)行，其中包括150平米的超十萬級的潔凈車間。我司堅持以自主研發(fā)為核心，現(xiàn)已生產(chǎn)出的脲酶、tRNA轉(zhuǎn)運(yùn)核糖核酸、刀豆球蛋白、胰蛋白酶抑制劑等產(chǎn)品，熱銷市場以來收到了客戶的廣泛好評。
公司秉承“ 摯誠科研、匠心傳承” 的發(fā)展理念，聚焦于前沿生物技術(shù)的應(yīng)用和創(chuàng)新，努力成為生物科技領(lǐng)域的標(biāo)桿企業(yè)。堅持以客戶為中心，致力于為中國的科研工作者提供高品質(zhì)的產(chǎn)品和專業(yè)服務(wù)，始終是我們努力的目標(biāo)和方向。