β-半乳糖苷酶（β-Galactosidase, β-GAL）試劑盒說(shuō)明書(shū)
分光光度法 50管/24樣
正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義：
β-GAL(EC 3.2.1.23)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，能夠催化β半乳糖苷化合物中β半乳糖苷鍵水解，此外還具有轉(zhuǎn)半乳糖苷的作用。β-GAL不僅可為植物的快速生長(zhǎng)釋放儲(chǔ)存的能量，還能在正常的多糖代謝、細(xì)胞壁組分代謝以及衰老時(shí)細(xì)胞壁降解過(guò)程中催化多糖、糖蛋白以及半乳糖脂末端半乳糖殘基的水解，釋放自由的半乳糖。
測(cè)定原理：
β-GAL分解對(duì)-硝基苯-β-D-吡喃半乳糖苷生成對(duì)-硝基苯酚，后者在400nm有最大吸收峰，通過(guò)測(cè)定吸光值升高速率來(lái)計(jì)算β-GAL活性。
組成：
產(chǎn)品名稱(chēng) | GMS032-50T/24S | Storage |
提取液：液體 | 50ml | 4℃ |
試劑一：粉劑 | 1瓶 | 4℃ |
試劑二：液體 | 15ml | -20℃ |
試劑三：液體 | 50ml | 4℃ |
說(shuō)明書(shū) | 一份 |
試劑一：粉劑×1瓶，-20℃保存；臨用前每瓶加入5ml蒸餾水，充分溶解備用；用不完的試劑仍-20℃保存。
自備儀器和用品：
可見(jiàn)分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1ml玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
粗酶液提取：
1、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；15000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。
2、組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱(chēng)取約0.1g組織，加入1ml提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。15000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。
3、培養(yǎng)液等液體樣本：直接檢測(cè)。
測(cè)定步驟：
1、分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至400nm，蒸餾水調(diào)零。
2、樣本測(cè)定（在EP管中依次加入下列試劑）：
試劑名稱(chēng)（μl） | 測(cè)定管 | 對(duì)照管 |
試劑一 | 200 |
|
蒸餾水 |
| 200 |
試劑二 | 250 | 250 |
樣本 | 50 | 50 |
迅速混勻，放入37℃準(zhǔn)確水浴30min
充分混勻，400nm處測(cè)定吸光值A(chǔ)，計(jì)算ΔA=A測(cè)定-A對(duì)照。每個(gè)測(cè)定管需設(shè)一個(gè)對(duì)照管。
β-GAL活性計(jì)算：
標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為y =0.00543x -0.0027；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（nmol/ml），y為吸光值。
（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算：
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘產(chǎn)生1nmol對(duì)-硝基苯酚定義為一個(gè)酶活力單位。
β-GAL活力(nmol/min/mg prot)=[(ΔA+0.0027)÷0.00543×V反總]÷(V樣×Cpr)÷T
=61.39×(ΔA+0.0027) ÷Cpr
需要另外測(cè)定，建議使用本公司BCA蛋白質(zhì)含量測(cè)定試劑盒。
（2）按樣本鮮重計(jì)算：
單位的定義：每g組織每分鐘產(chǎn)生1nmol對(duì)-硝基苯酚定義為一個(gè)酶活力單位。
β-GAL活力(nmol/min /g鮮重)＝[(ΔA+0.0027)÷0.00543×V反總]÷(W×V樣÷V樣總)÷T
=61.39×(ΔA+0.0027) ÷W
（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算：
單位的定義：每1萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘產(chǎn)生1nmol對(duì)-硝基苯酚定義為一個(gè)酶活力單位。
β-GAL活力(nmol/min /104 cell)=[(ΔA+0.0027) ÷0.00543×V反總]÷(500×V樣÷V樣總)÷T
=0.123×(ΔA +0.0027)
（4）按液體體積計(jì)算：
單位的定義：每ml液體樣本每分鐘產(chǎn)生1nmol對(duì)-硝基苯酚定義為一個(gè)酶活力單位。
β-GAL活力(nmol/min /ml)＝[(ΔA+0.0027)÷0.00543×V反總]÷V樣÷T
=61.39×(ΔA+0.0027)
V反總：反應(yīng)體系總體積，0.5ml；V樣：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.05ml；V樣總：加入提取液體積，1ml；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g； 500：細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù)，500萬(wàn)；T：反應(yīng)時(shí)間，30min。
其他推薦產(chǎn)品：
刀豆球蛋白A（ConA）:11028-71-0
葡萄糖氧化酶:9001-37-0
胰α淀粉酶:9000-90-2
黃嘌呤氧化酶（來(lái)源于牛奶）:9002-17-9
β-葡萄糖苷酶（杏仁）:9001-22-3
乙酰膽堿酯酶（蒼蠅頭）:9000-81-1
胰蛋白酶抑制劑（大豆）:9035-81-8
Yeast tRNA(Carrier RNA):9014-25-9
另有各類(lèi)實(shí)驗(yàn)室緩沖液、溶液、生化試劑盒，量大價(jià)優(yōu)，誠(chéng)邀經(jīng)銷(xiāo)商！
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伊勢(shì)久（江蘇連云港）生物科技有限責(zé)任公司，成立于2019年，坐落于新亞歐大陸橋東方橋頭堡連云港市。公司由資深行業(yè)專(zhuān)家和雙一流高校博士聯(lián)合創(chuàng)辦，主要從事生化檢測(cè)、病理檢測(cè)和原料酶等相關(guān)試劑的研發(fā)和生產(chǎn)。
我司位于聯(lián)東U谷科技創(chuàng)新谷內(nèi)的2000平米的生產(chǎn)、研發(fā)基地已建成投入運(yùn)行，其中包括150平米的超十萬(wàn)級(jí)的潔凈車(chē)間。我司堅(jiān)持以自主研發(fā)為核心，現(xiàn)已生產(chǎn)出的脲酶、tRNA轉(zhuǎn)運(yùn)核糖核酸、刀豆球蛋白、胰蛋白酶抑制劑等產(chǎn)品，熱銷(xiāo)市場(chǎng)以來(lái)收到了客戶(hù)的廣泛好評(píng)。
公司秉承“ 摯誠(chéng)科研、匠心傳承” 的發(fā)展理念，聚焦于前沿生物技術(shù)的應(yīng)用和創(chuàng)新，努力成為生物科技領(lǐng)域的標(biāo)桿企業(yè)。堅(jiān)持以客戶(hù)為中心，致力于為中國(guó)的科研工作者提供高品質(zhì)的產(chǎn)品和專(zhuān)業(yè)服務(wù)，始終是我們努力的目標(biāo)和方向。