漆酶（Laccase）試劑盒說明書
微量法100T/48S
正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義：
漆酶（CE1.10.3.2）是一種含銅的多酚氧化酶，屬于銅藍氧化酶家族，廣泛分布于真菌和高等植物中，
具有較強的氧化還原能力，在紙漿生物漂白，環(huán)境污染物降解和木質(zhì)纖維素降解以及生物檢測方面有非常
廣泛的應(yīng)用。
測定原理：
漆酶分解底物ABTS產(chǎn)生ABTS自由基，在420nm處的吸光系數(shù)遠大于底物ABTS，測定ABTS自由
基的增加速率，可計算得漆酶活性。
自備儀器和用品：
天平、低溫離心機、可見分光光度計/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、恒溫水浴鍋。
酶液提?。?/p>
1、組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml
提取液），進行冰浴勻漿。12000g4℃離心30min，取上清，置冰上待測。
2、細胞：按照細胞數(shù)量（104個）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細胞加入
1ml提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然后4℃，10000g
離心10min，取上清置于冰上待測。
3、細胞培養(yǎng)液：直接檢測。
注意事項
1、極少數(shù)樣本在60℃水浴20min后會出現(xiàn)沉淀，可經(jīng)過8000g25℃離心10min后，取上清檢測，例
如成熟的水稻葉片樣本。
2、為確保檢測準(zhǔn)確性，若ΔA大于1，將樣本用提取液稀釋2~10倍后重新檢測，計算公式乘以相應(yīng)
稀釋倍數(shù)。
酶活性計算公式：
a．用微量石英比色皿測定的計算公式如下
1．按照蛋白濃度計算
酶活性定義：每毫克蛋白每分鐘氧化1nmol底物ABTS所需的酶量為一個酶活力單位。
漆酶活性（nmol/min/mgprot）=×V反總÷（V樣×Cpr）÷T=9.26×△A÷Cpr
2．按照樣本質(zhì)量計算
酶活性定義：每克樣品每分鐘氧化1nmol底物ABTS所需的酶量為一個酶活力單位。
漆酶活性（nmol/min/g鮮重）=×V反總÷（V樣×W÷V樣總）÷T=9.26×△A÷W
3．按照細胞數(shù)量計算
酶活性定義：每104個細胞每分鐘氧化1nmol底物ABTS所需的酶量為一個酶活力單位。
漆酶活性（nmol/min/104cell）=×V反總÷（V樣×細胞數(shù)量÷V樣總）÷T=9.26×△A÷細胞數(shù)量
4．按照液體體積計算
酶活性定義：每升培養(yǎng)液每分鐘氧化1nmol底物ABTS所需的酶量為一個酶活力單位。
漆酶活性（nmol/min/L）=×V反總÷V樣÷T=9260×△A
ε：ABTS毫摩爾消光系數(shù)：36L/mmol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V反總：反應(yīng)總體積，0.3ml；V
樣：反應(yīng)體系中樣本體積，0.03ml；V樣總：加入提取液體積，1ml；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml；W，
樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時間，20min
b.用96孔板測定的計算公式如下
1．按照蛋白濃度計算
酶活性定義：每毫克蛋白每分鐘氧化1nmol底物ABTS所需的酶量為一個酶活力單位。
漆酶活性（nmol/min/mgprot）=×V反總÷（V樣×Cpr）÷T=18.52×△A÷Cpr
2．按照樣本質(zhì)量計算
酶活性定義：每克樣品每分鐘氧化1nmol底物ABTS所需的酶量為一個酶活力單位。
漆酶活性（nmol/min/g鮮重）=×V反總÷（V樣×W÷V樣總）÷T=18.52×△A÷W
3．按照細胞數(shù)量計算
酶活性定義：每104個細胞每分鐘氧化1nmol底物ABTS所需的酶量為一個酶活力單位。
漆酶活性（nmol/min/104cell）=×V反總÷（V樣×細胞數(shù)量÷V樣總）÷T
=18.52×△A÷細胞數(shù)量
4．按照液體體積計算
酶活性定義：每升培養(yǎng)液每分鐘氧化1nmol底物ABTS所需的酶量為一個酶活力單位。
漆酶活性（nmol/min/L）=×V反總÷V樣÷T=18520×△A
ε：ABTS毫摩爾消光系數(shù)：36L/mmol/cm；d：比色皿光徑，0.5cm；V反總：反應(yīng)總體積，0.3ml；V
樣：反應(yīng)中樣本體積，0.045ml；V樣總：加入提取液體積，1ml；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml；W，樣本
質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時間，20min。
關(guān)鍵字： 漆酶檢測試劑盒;
伊勢久（江蘇連云港）生物科技有限責(zé)任公司，成立于2019年，坐落于新亞歐大陸橋東方橋頭堡連云港市。公司由資深行業(yè)專家和雙一流高校博士聯(lián)合創(chuàng)辦，主要從事生化檢測、病理檢測和原料酶等相關(guān)試劑的研發(fā)和生產(chǎn)。
我司位于聯(lián)東U谷科技創(chuàng)新谷內(nèi)的2000平米的生產(chǎn)、研發(fā)基地已建成投入運行，其中包括150平米的超十萬級的潔凈車間。我司堅持以自主研發(fā)為核心，現(xiàn)已生產(chǎn)出的脲酶、tRNA轉(zhuǎn)運核糖核酸、刀豆球蛋白、胰蛋白酶抑制劑等產(chǎn)品，熱銷市場以來收到了客戶的廣泛好評。
公司秉承“ 摯誠科研、匠心傳承” 的發(fā)展理念，聚焦于前沿生物技術(shù)的應(yīng)用和創(chuàng)新，努力成為生物科技領(lǐng)域的標(biāo)桿企業(yè)。堅持以客戶為中心，致力于為中國的科研工作者提供高品質(zhì)的產(chǎn)品和專業(yè)服務(wù)，始終是我們努力的目標(biāo)和方向。