蛋白表達(dá)預(yù)實(shí)驗(yàn)服務(wù)內(nèi)容
本服務(wù)提供從基因到蛋白表達(dá)的全流程預(yù)實(shí)驗(yàn)支持,涵蓋原核(如大腸桿菌BL21(DE3)菌株)、真核(如畢赤酵母pPICZ/pPICZα載體)及哺乳動物細(xì)胞(如pCMV-N-YFP質(zhì)粒)等多種表達(dá)系統(tǒng)??蛻粜杼峁┠康幕蛐蛄校ɑ騁enBank登錄號)、蛋白種屬、分子量及特征(如分泌型、膜蛋白、毒性蛋白等),并選擇基因合成(含密碼子優(yōu)化)或自有模板。服務(wù)參數(shù)包括誘導(dǎo)條件優(yōu)化(溫度25–30℃、IPTG濃度及誘導(dǎo)時間)、小規(guī)模表達(dá)測試(≤1L培養(yǎng)體積)及表達(dá)水平檢測(如SDS-PAGE、Western Blot或熒光標(biāo)記分析)。
使用流程與注意事項(xiàng)實(shí)驗(yàn)流程包括載體構(gòu)建、宿主轉(zhuǎn)化、誘導(dǎo)表達(dá)及樣本處理(裂解、離心等)。需注意:1)毒性蛋白建議使用專用菌株(如Agilent Competent Cell Pack)或哺乳動物系統(tǒng)以避免包涵體;2)分泌型蛋白需配套信號肽載體;3)樣本需添加蛋白酶抑制劑并低溫保存以防降解。預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果將提供表達(dá)效率、可溶性及純度(≥70%)分析報(bào)告,并推薦放大實(shí)驗(yàn)條件。
特別提示客戶需明確蛋白后期應(yīng)用(如結(jié)晶、抗原制備),以便優(yōu)化表達(dá)策略。存儲條件依系統(tǒng)而異(如-80℃保存competent cells),載體抗性需匹配篩選標(biāo)記(如卡那霉素)。預(yù)實(shí)驗(yàn)周期通常為2–4周,建議提前溝通特殊需求(如同位素標(biāo)記)。
鄭州赫昂生物科技有限公司
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