細胞核提取試劑盒
一、產(chǎn)品簡介。
細胞核是細胞內(nèi)的細胞器，也是遺傳物質(zhì)分布的重要場所，分離細胞核，可用于轉錄調(diào)控相關的生物學實驗。本產(chǎn)品利用蔗糖密度梯度離心法，能夠快速且完整的分離細胞核。
二、運輸與存儲條件。
本產(chǎn)品常溫運輸，4 ℃保存，有效期 12 個月。
三、特點與優(yōu)勢。
1. 本產(chǎn)品操作簡單，可以快速分離細胞核。
2. 本產(chǎn)品分離的細胞核完整，純度高。
四、自備試劑與耗材。
PBS、RIPA 裂解液（不含 SDS）、1.5 ml 離心管、震蕩混勻儀（Vortex mixer）、冷凍離心機。
五、使用說明。
1. 細胞處理。胰酶消化法收集貼壁生長細胞，或離心法直接收集懸浮培養(yǎng)細胞，每個樣品中細胞數(shù)量為 2×107，加入 1 ml Buffer NA，震蕩（Vortex），重懸細胞。
2. 細胞裂解。將細胞重懸液轉入勻漿器，勻漿 50-100 次，至顯微鏡下觀察到 80%以上細胞都破碎為止。
3. 離心。將細胞勻漿液轉移至 1.5 ml 離心管，600×g，4 ℃離心 10 min，上清轉移至新的 1.5 ml離心管，即為細胞漿（可保存在-80 ℃），沉淀為粗細胞核。
4. 粗細胞核中加入 1 ml Buffer NA 重懸，600×g，4 ℃離心 10 min，棄上清。
5. 細胞核純化。向細胞核沉淀中加入 1 ml Buffer NB，震蕩（vortex）重懸，16,000×g，4 ℃離心15-30 min，棄上清。
6. 細胞核洗滌。向細胞核沉淀中加入 1 ml Buffer NA，震蕩（vortex）重懸，600×g，4 ℃離心 10 min，棄上清，沉淀即為純化細胞核。
7. 細胞核可暫時存放在-80 ℃冰箱中，也可立即裂解，抽提核蛋白。
8. 細胞核裂解。主要包括以下二種方式。
1) 變性裂解液裂解。利用本公司的細胞裂解液（Laemmli Buffer，2×）重懸細胞核沉淀，裂解細胞核，提取細胞核蛋白，用于 western blot 分析。但提取蛋白已經(jīng)變性，不可用于酶活性測定。
2) RIPA 裂解液裂解。利用溫和的 RIPA 裂解液（不含 SDS）重懸細胞核沉淀，裂解細胞核，提取蛋白，用于酶活性測定及 western blot 等實驗。
六、注意事項
1. 整個操作過程需在低溫條件下進行，所用試劑提前預冷。
2. 為了減少其它細胞器污染，提取的細胞漿溶液可以12,000×g，4 ℃離心15 min，棄沉淀，上清即為純化后的細胞漿，轉移至新的離心管，凍存。
3. 為了抑制蛋白降解，實驗過程中可添加蛋白酶抑制劑（如cocktail等）。
關鍵字： 細胞核提取試劑盒;高純細胞核分離;
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