Annexin V 熒光染料是細(xì)胞生物學(xué)和醫(yī)學(xué)研究中用于檢測(cè)細(xì)胞凋亡的核心工具之一。它是膜聯(lián)蛋白家族中的一種細(xì)胞蛋白，該家族蛋白質(zhì)具有鈣離子依賴(lài)性結(jié)合陰離子磷脂的特性。雖然其具體細(xì)胞功能尚未完全闡明，但現(xiàn)有研究表明其主要參與凝血過(guò)程。在細(xì)胞健康狀態(tài)分析中，膜聯(lián)蛋白V通過(guò)特異性結(jié)合磷脂酰絲氨酸（PS）來(lái)識(shí)別凋亡細(xì)胞。PS原本存在于細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)小葉，當(dāng)細(xì)胞啟動(dòng)凋亡程序時(shí)，PS會(huì)外翻至細(xì)胞膜外側(cè)。為便于檢測(cè)和定量，膜聯(lián)蛋白V偶聯(lián)物通常標(biāo)記有熒光素、藻膽蛋白或半抗原分子（如生物素）。
核心功能
1.特異性結(jié)合磷脂酰絲氨酸： Annexin V 是一種鈣離子依賴(lài)的磷脂結(jié)合蛋白，對(duì)細(xì)胞膜磷脂酰絲氨酸具有極高的親和力和特異性。
2.標(biāo)記凋亡細(xì)胞： 在健康的活細(xì)胞中，磷脂酰絲氨酸主要分布在細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè)（胞質(zhì)面）。在細(xì)胞凋亡的早期階段，磷脂酰絲氨酸會(huì)從細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)翻轉(zhuǎn)到外側(cè)（暴露在細(xì)胞表面）。Annexin V 熒光染料能夠結(jié)合到這些暴露在外側(cè)的磷脂酰絲氨酸上，從而將凋亡細(xì)胞（尤其是早期凋亡細(xì)胞）標(biāo)記出來(lái)。
3.區(qū)分凋亡階段： 通常需要與另一種染料 碘化丙啶 結(jié)合使用：
Annexin V 陽(yáng)性 / PI 陰性： 早期凋亡細(xì)胞 (細(xì)胞膜磷脂酰絲氨酸外翻，但細(xì)胞膜完整性尚存，PI 無(wú)法進(jìn)入)。
Annexin V 陽(yáng)性 / PI 陽(yáng)性： 晚期凋亡或壞死細(xì)胞 (細(xì)胞膜磷脂酰絲氨酸外翻，且細(xì)胞膜完整性喪失，PI 可進(jìn)入細(xì)胞核染色)。
Annexin V 陰性 / PI 陰性： 活細(xì)胞 (磷脂酰絲氨酸不外翻，細(xì)胞膜完整)。
Annexin V 陰性 / PI 陽(yáng)性： 壞死細(xì)胞或機(jī)械損傷細(xì)胞 (磷脂酰絲氨酸可能未及時(shí)外翻或外翻程度低，但膜已破損。這種情況相對(duì)少見(jiàn)，更常見(jiàn)的是雙陽(yáng)性)。
主要優(yōu)勢(shì)
1.早期檢測(cè)： 能夠檢測(cè)凋亡過(guò)程中發(fā)生得非常早的事件——磷脂酰絲氨酸外翻，遠(yuǎn)早于細(xì)胞形態(tài)發(fā)生顯著改變或 DNA 斷裂。這對(duì)于研究凋亡的起始機(jī)制至關(guān)重要。
2.高靈敏度和特異性： Annexin V 對(duì)其靶點(diǎn)磷脂酰絲氨酸具有高度特異性和親和力，能可靠地區(qū)分凋亡細(xì)胞和健康活細(xì)胞。
3.定量分析： 尤其是與流式細(xì)胞術(shù)結(jié)合時(shí)，可以對(duì)群體中處于不同凋亡階段（早期凋亡、晚期凋亡/壞死）的細(xì)胞比例進(jìn)行精確的定量分析。
4.區(qū)分凋亡與壞死： 與 PI 等膜不通透性核酸染料聯(lián)用，是區(qū)分凋亡（尤其是早期）和壞死的最常用且有效的方法之一。
5.操作相對(duì)簡(jiǎn)便快速： 標(biāo)準(zhǔn)的 Annexin V/PI 染色流程相對(duì)簡(jiǎn)單，通?？稍?1-2 小時(shí)內(nèi)完成，適用于高通量篩選。
6.多種檢測(cè)平臺(tái)兼容
流式細(xì)胞術(shù)： 最常用、最強(qiáng)大的定量分析方法。
熒光顯微鏡： 可進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察和定位，適用于貼壁細(xì)胞或需要觀察單個(gè)細(xì)胞的情況。
熒光微孔板讀數(shù)儀： 適用于高通量篩選，提供群體水平的熒光強(qiáng)度信息。
激光共聚焦顯微鏡： 提供高分辨率的三維成像。
7.適用于多種細(xì)胞類(lèi)型： 可用于懸浮細(xì)胞、貼壁細(xì)胞、原代細(xì)胞、細(xì)胞系等多種樣本。
Annexin V 熒光染料憑借其特異性結(jié)合凋亡細(xì)胞表面暴露的磷脂酰絲氨酸的核心功能，具有早期檢測(cè)、高靈敏特異、定量分析、區(qū)分凋亡/壞死、操作簡(jiǎn)便、平臺(tái)兼容性好等顯著優(yōu)勢(shì)。它被廣泛應(yīng)用于基礎(chǔ)生命科學(xué)研究和應(yīng)用醫(yī)學(xué)研究的眾多領(lǐng)域，特別是在細(xì)胞凋亡檢測(cè)、抗腫瘤藥物篩選與機(jī)制研究、毒理學(xué)評(píng)估等方面發(fā)揮著不可替代的作用。與膜完整性染料（如 PI）的聯(lián)合使用是其標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用模式。