1、SDS-PAGE凝膠制備試劑盒為什么上層膠和下層膠分界面不平齊?
上層膠溶液加入下層膠的時(shí)候沖擊力太大,容易造成上、下層膠分界線(xiàn)不平整。建議灌注上層膠時(shí)使用1mL移液器,盡量不要垂直灌入,將灌膠槍頭水平放置緩慢注入凝膠液,可獲得平齊的界面。
2、拔梳子后泳道出現(xiàn)膠絲?
TEMED 用量過(guò)多會(huì)導(dǎo)致膠凝固過(guò)快,拔出梳子后泳道會(huì)出現(xiàn)膠絲。建議按照說(shuō)明書(shū)要求添加TEMED,如有需要可以適當(dāng)減少TEMED 用量。
3、蛋白marker從濃縮膠就開(kāi)始分離了?
蛋白marker從濃縮膠開(kāi)始分離為正常現(xiàn)象,本產(chǎn)品制備出的凝膠其上層膠具有一定的壓縮能力,不過(guò)濃縮效果與傳統(tǒng)SDS-PAGE凝膠有區(qū)別,與預(yù)制膠類(lèi)似。但與傳統(tǒng)PAGE膠相比,對(duì)蛋白條帶分離效果更好,小分子量蛋白也可以清晰地分離開(kāi),且蛋白條帶更窄更銳利。
4、膠制好后,可在4℃存放多久?
SDS-PAGE凝膠制備試劑盒制備好的凝膠可在4℃保存1-2周,為確保較好的電泳效果,請(qǐng)盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。推薦保存方法:制膠后,連同梳子置于自封袋中,加少量電泳緩沖液保持膠板濕潤(rùn),密封后置于4℃保存。
5、為什么我制的膠凝固很慢?
凝膠時(shí)間跟溫度和促凝劑用量的關(guān)系很大,實(shí)驗(yàn)室溫度較低或者促凝劑加的不夠會(huì)導(dǎo)致凝膠時(shí)間慢。若需縮短凝膠時(shí)間,可適當(dāng)提高促凝劑的用量(在說(shuō)明書(shū)用量的基礎(chǔ)上增加5%-10%)或者補(bǔ)加TEMED,以加快凝膠速度。
6、制備好的凝膠中有氣泡?
在配膠之前,使膠溶液及緩沖液平衡到室溫(如室溫放置幾分鐘),可有效避免凝膠中氣泡的形成。
7、可以進(jìn)行非變性蛋白電泳嗎?
可以用于非變性蛋白電泳,產(chǎn)品不含SDS,可以用于非變性凝膠電泳。
8、帶顏色的組分為什么會(huì)有沉淀?
由于該組分中染料的特殊理化性質(zhì),長(zhǎng)期靜置會(huì)有部分沉淀析出,屬于正?,F(xiàn)象,使用前搖勻即可。
9、灌膠之后等待很久膠不凝固?
可能是促凝劑失效,促凝劑對(duì)溫度較敏感,一定要低溫保存。促凝劑在4℃可存放3個(gè)月,性能穩(wěn)定。長(zhǎng)期儲(chǔ)存放-20°C。