背景[1-3]
綿羊痘病毒(SPPV)核酸檢測(cè)試劑盒(熒光-PCR法)適用于檢測(cè)綿羊痘病毒(SPPV)的DNA，用于綿羊痘病毒(SPPV)感染的輔助診斷，其檢測(cè)結(jié)果僅供參考。本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對(duì)照，僅提供人工合成的特異性DNA片段標(biāo)準(zhǔn)品作為陽(yáng)性對(duì)照，僅限于專(zhuān)業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療用途。
綿羊痘病毒(SPPV)核酸檢測(cè)試劑盒(熒光-PCR法)
技術(shù)原理
綿羊痘病毒(SPPV)核酸檢測(cè)試劑盒(熒光-PCR法)采用TaqMan一步法熒光定量PCR技術(shù)，結(jié)合特異性擴(kuò)增引物對(duì)目的基因進(jìn)行體外擴(kuò)增，本試劑盒具有靈敏性高、特異性強(qiáng)、反應(yīng)時(shí)間短等優(yōu)點(diǎn)，操作簡(jiǎn)便，污染概率低等特點(diǎn)。
產(chǎn)品特點(diǎn)
特異性好：采用TaqMan熒光探針?lè)ㄟM(jìn)行擴(kuò)增。靈敏度高：檢測(cè)靈敏度可達(dá)500copies/uL以下。操作簡(jiǎn)便：采用一步法熒光定量PCR進(jìn)行擴(kuò)增，逆轉(zhuǎn)錄步驟與PCR擴(kuò)增在一管反應(yīng)液中完成。
適用儀器
ABI、安捷倫、Roche、博日，朗基，柏恒等梯度PCR儀。自備：無(wú)DNA/RNA酶的1.5mL離心管，0.2mL PCR反應(yīng)管，濾芯吸頭(規(guī)格:10μL，200μL，1000μL)，離心機(jī)，振蕩混合器，各種規(guī)格的移液器。
應(yīng)用[4][5]
綿羊痘病毒(SPPV)核酸檢測(cè)試劑盒(熒光-PCR法)可以用于綿羊痘病毒甘肅株的分離鑒定及雙重PCR檢測(cè)方法的初步建立
研究進(jìn)行了以下幾個(gè)方面的工作：1、綿羊痘病毒甘肅株的分離鑒定從甘肅張掖市發(fā)病羊采集病料,采用羔羊睪丸細(xì)胞分離到一株SPPV,通過(guò)擴(kuò)增SPPV特異性很強(qiáng)的P32基因,以及對(duì)P32基因的序列分析,從綿羊痘病毒(SPPV)核酸檢測(cè)試劑盒(熒光-PCR法)分子水平鑒定該毒株為SPPV,命名為GansuZY-isolate。2、綿羊痘病毒甘肅株P(guān)32,GPCR,RPO30基因的克隆與序列分析克隆了GansuZY-isolate株的P32,GPCR和RP030基因。序列分析表明,該毒株的這三個(gè)基因與其他SPPV的相似性均在99.0%-100%之間,說(shuō)明這三個(gè)基因在SPPV不同毒株之間具有高度的保守性。進(jìn)化分析表明,這3個(gè)基因均在SPPV的分支里面,與中國(guó)其他地方報(bào)道的SPPV株在進(jìn)化上比較接近,說(shuō)明目前我國(guó)SPPV的流行毒株比較穩(wěn)定,沒(méi)有發(fā)生大的基因變異。3、羊痘病毒雙重PCR檢測(cè)方法的建立初步建立了P32與InS-1,GPCR與InS-1,RPO30與InS-1的雙重PCR檢測(cè)方法。結(jié)果表明,三種方法均具有良好的特異性；敏感性試驗(yàn)表明,P32與InS-1基因、GPCR與InS-1基因雙重PCR反應(yīng)的靈敏度為652ng;RPO30與InS-1基因雙重PCR反應(yīng)的靈敏度為65.2ng。
參考文獻(xiàn)
[1]TaqMan based real-time duplex PCR for simultaneous detection and quantitation of capripox and orf virus genomes in clinical samples[J].G.Venkatesan;;V.Balamurugan;;V.Bhanuprakash.Journal of Virological Methods.2014
[2]Multiplex PCR for simultaneous detection and differentiation of sheeppox,goatpox and orf viruses from clinical samples of sheep and goats[J].G.Venkatesan;;V.Balamurugan;;V.Bhanuprakash.Journal of Virological Methods.2014
[3]Pathology and Viral Antigen Distribution following Experimental Infection of Sheep and Goats with Capripoxvirus[J].C.Embury-Hyatt;;S.Babiuk;;L.Manning;;S.Ganske;;T.R.Bowden;;D.B.Boyle;;J.Copps.Journal of Comparative Pathology,2011(2-3)
[4]Pox outbreaks in Sheep and Goats at Makhdoom(Uttar Pradesh),India:Evidence of Sheeppox Virus Infection in Goats[J].V.Bhanuprakash;G.Venkatesan;V.Balamurugan;M.Hosamani;R.Yogisharadhya;R.S.Chauhan;A.Pande;B.Mondal;R.K.Singh.Transboundary and Emerging Diseases,2010(5)
[5]蘇海龍.綿羊痘病毒甘肅株的分離鑒定及雙重PCR檢測(cè)方法的初步建立[D].西北民族大學(xué),2014.