4-(4-硝基苯基)丁酸（4-(4-Nitrophenyl) butyric acid，NPBA）的分子式為C10H11NO4。其分子結(jié)構(gòu)由苯環(huán)、硝基和丁酸鏈組成。純品為黃色結(jié)晶粉末，微溶于水，易溶于甲醇、乙醇等極性有機(jī)溶劑。硝基的吸電子效應(yīng)使其酸性強(qiáng)于4-苯基丁酸（4-PBA），pKa約為3.8，在中性條件下以陰離子形式存在，易與金屬離子形成鹽類化合物。

4-(4-硝基苯基)丁酸

作為L(zhǎng)C-HRMS內(nèi)標(biāo)的應(yīng)用

在4-苯基丁酸（4-PBA）的定量分析中，NPBA因與4-PBA結(jié)構(gòu)相似（僅苯環(huán)4位多一個(gè)硝基），成為理想的內(nèi)標(biāo)物（IS），質(zhì)譜響應(yīng)匹配：NPBA與4-PBA的質(zhì)荷比（m/z）差異顯著（NPBA為208.06 [M-H]?，4-PBA為163.08 [M-H]?），可通過(guò)選擇離子監(jiān)測(cè)（SIM）模式同時(shí)檢測(cè)，減少基質(zhì)干擾。在NBA和DMEM中，添加 NPBA 后，4-PBA的定量下限（LLOQ）達(dá)0.38 μM，日內(nèi)和日間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）均 < 15%，回收率在 92.5%–114.2% 之間，證明內(nèi)標(biāo)法可顯著提升分析精度。樣品制備時(shí)，將 NPBA（0.02 μM）與甲醇按 1:3 比例加入培養(yǎng)基，經(jīng)蛋白沉淀、離心和溶劑蒸發(fā)后，通過(guò) LC-HRMS 檢測(cè)，其穩(wěn)定的響應(yīng)值可校正基質(zhì)效應(yīng)和進(jìn)樣誤差。

在阿爾茨海默病模型中，NPBA輔助的LC-HRMS方法可定量檢測(cè) NBA培養(yǎng)基中4-PBA的濃度。3Tg-iAstro細(xì)胞經(jīng)4-PBA處理48 h后，培養(yǎng)基中殘留的 4-PBA 濃度為0.38 ± 0.02 μM，該濃度可部分恢復(fù)野生型星形膠質(zhì)細(xì)胞的蛋白質(zhì)合成，但對(duì)3Tg-AD 細(xì)胞無(wú)效。在黑色素瘤細(xì)胞（CHL-1 和 A375）中，NPBA內(nèi)標(biāo)法顯示5 μM 4-PBA可抑制毒胡蘿卜素（TG）誘導(dǎo)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激（ER stress），且細(xì)胞對(duì)4-PBA的吸收不受TG濃度影響，胞內(nèi)濃度達(dá)1.00 μM時(shí)即可發(fā)揮作用[1]。

合成

經(jīng)典路線為4-硝基苯乙酸與溴丁酸在堿性條件下發(fā)生親核取代反應(yīng)，或通過(guò)硝基苯與丁二酸酐經(jīng)傅克?；苽?-(4-硝基苯基)丁酸，反應(yīng)需在無(wú)水溶劑（如 DMF）中進(jìn)行，產(chǎn)物經(jīng)重結(jié)晶純化。

參考文獻(xiàn)

[1]Salvatore V ,Giulia D ,Laura T , et al.Quantification of the Chemical Chaperone 4-Phenylbutyric Acid (4-PBA) in Cell Culture Media via LC-HRMS: Applications in Fields of Neurodegeneration and Cancer[J].Pharmaceuticals,2023,16(2):298-298.