背景[1-3]
CDK4抗體是一種針對(duì)細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶4(Cyclin-dependent kinase 4,簡稱CDK4)的特異性抗體。CDK4是一個(gè)重要的細(xì)胞周期調(diào)控激酶,主要參與細(xì)胞周期的調(diào)節(jié),特別是G1期的進(jìn)程。因此,CDK4抗體為科學(xué)家們提供了深入研究細(xì)胞周期調(diào)控機(jī)制的機(jī)會(huì)。
這種抗體具有高度的特異性,能夠識(shí)別并結(jié)合CDK4蛋白。它由多個(gè)不同的抗體克隆組成,提供了更廣泛的識(shí)別能力,增強(qiáng)了對(duì)CDK4蛋白的檢測靈敏度。CDK4多克隆抗體的制備方法通常包括免疫原蛋白免疫小動(dòng)物以激發(fā)其免疫系統(tǒng)產(chǎn)生CDK4特異性抗體,然后采集免疫動(dòng)物的血清并分離純化CDK4多克隆抗體。
CDK4抗體
CDK4抗體在多個(gè)領(lǐng)域都有廣泛的應(yīng)用。首先,它可以用于研究CDK4在不同細(xì)胞周期階段的表達(dá)和活性,幫助人們更深入地了解CDK4在細(xì)胞周期調(diào)控中的作用。其次,它還可以用于研究CDK4在腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)水平以及其對(duì)腫瘤生長的影響,為腫瘤治療藥物的研發(fā)提供有力的工具。此外,CDK4抗體還可以用于篩選和評(píng)估潛在的CDK4抑制劑,這對(duì)于腫瘤治療藥物的開發(fā)具有重要的意義。
在具體使用過程中,CDK4抗體的稀釋比例可能因?qū)嶒?yàn)需求和抗體類型而有所不同。例如,在Western Blotting實(shí)驗(yàn)中,推薦的稀釋比通常為1:1,000~1:2,000。而在免疫細(xì)胞化學(xué)(ICC)實(shí)驗(yàn)中,稀釋比可能為1:50~1:200。因此,在使用CDK4抗體進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí),建議遵循產(chǎn)品說明書或相關(guān)實(shí)驗(yàn)指南的推薦稀釋比例。
雖然CDK4抗體在科研和藥物開發(fā)領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用價(jià)值,但其使用也需要遵循相關(guān)的實(shí)驗(yàn)規(guī)范和安全操作要求。如需購買CDK4抗體,可以選擇從正規(guī)的生物科技公司或經(jīng)銷商處購買,并確保產(chǎn)品的質(zhì)量和來源可靠。同時(shí),在使用抗體進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí),也應(yīng)注意實(shí)驗(yàn)條件的控制和數(shù)據(jù)的分析解讀,以確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。
應(yīng)用[4-5]
CDK4抗體可以用于抗CDK4胞內(nèi)抗體抑制腫瘤細(xì)胞生長和轉(zhuǎn)移
腫瘤是一種嚴(yán)重威脅人類健康的疾病,由于具有擴(kuò)散遷移及轉(zhuǎn)移浸潤的能力,使得腫瘤的治療尚缺乏有效的手段。細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶(cyclin-dependent kinase,CDK)是細(xì)胞周期調(diào)控的活化中心,CDK4/CDK6能夠與細(xì)胞周期蛋白Cyclin D1形成復(fù)合物,進(jìn)而調(diào)控細(xì)胞周期G1/S期的轉(zhuǎn)換。研究表明,CDK4在多種惡性腫瘤和癌變組織中過度表達(dá),所以CDK4與腫瘤的發(fā)生,發(fā)展密切相關(guān)。以CDK4為靶點(diǎn)的基因治療體現(xiàn)在RNA干擾、反義寡核苷酸等方面,但這些治療方法都存在一定的不穩(wěn)定性和局限性。胞內(nèi)抗體技術(shù)是近年來興起的基因治療技術(shù),以CDK4抗體為效應(yīng)分子,在細(xì)胞內(nèi)特異性滅活靶蛋白,為腫瘤的基因治療拓寬了新的視野。
本研究將攜帶細(xì)胞核滯留型抗人CDK4胞內(nèi)scFv基因(NLS-AK)的質(zhì)粒,成功的轉(zhuǎn)染進(jìn)MDA-MB-231細(xì)胞中,該基因在MDA-MB-231細(xì)胞中得到有效表達(dá)并實(shí)現(xiàn)胞內(nèi)抗體的核定位,NLS-AK的穩(wěn)定表達(dá)顯著抑制腫瘤細(xì)胞的生長和增殖,引起細(xì)胞周期阻滯在G1/S期,并明顯誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡?,F(xiàn)在有研究證明Cyclin D1與腫瘤的浸潤和遷移存在密切的關(guān)系,作為G1/S期轉(zhuǎn)換過程中同CyclinD1形成復(fù)合物的CDK4及CDK4抗體是否能夠影響腫瘤的遷移和浸潤以及其抗腫瘤機(jī)制尚不清楚。
研究首先篩選獲得穩(wěn)定表達(dá)NLS-AK的MDA-MB-231細(xì)胞株,通過劃痕實(shí)驗(yàn)、Transwell實(shí)驗(yàn)分析,發(fā)現(xiàn)CDK4抗體NLS-AK能夠顯著抑制MDA-MB-231細(xì)胞的遷移和侵襲。這些研究結(jié)果為胞內(nèi)抗體在腫瘤的基因治療中的應(yīng)用得提供相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
參考文獻(xiàn)
[1]The detection of ESR1/PGR/ERBB2 mRNA levels by RT-QPCR:a better approach for subtyping breast cancer and predicting prognosis[J].Xin Du;;Xiao-Qing Li;;Lin Li;;Yuan-Yuan Xu;;Yu-Mei Feng.Breast Cancer Research and Treatment,2013(1)
[2]Tumor Suppression in the Absence of p53-Mediated Cell-Cycle Arrest,Apoptosis,and Senescence[J].Tongyuan Li;;Ning Kon;;Le Jiang;;Minjia Tan;;Thomas Ludwig;;Yingming Zhao;;Richard Baer;;Wei Gu.Cell,2012(6)
[3]Semaphorin 4D cooperates with VEGF to promote angiogenesis and tumor progression[J].Hua Zhou;Nada Binmadi;Ying-Hua Yang;Patrizia Proia;John Basile.Angiogenesis,2012(3)
[4]A Systematic Screen for CDK4/6 Substrates Links FOXM1 Phosphorylation to Senescence Suppression in Cancer Cells[J].Lars Anders;;Nan Ke;;Per Hydbring;;Yoon J.Choi;;Hans R.Widlund;;Joel M.Chick;;Huili Zhai;;Marc Vidal;;Stephen P.Gygi;;Pascal Braun;;Piotr Sicinski.Cancer Cell,2011(5)
[5]周勛.抗CDK4胞內(nèi)抗體抑制腫瘤細(xì)胞生長和轉(zhuǎn)移[D].吉林大學(xué),2014.