背景[1-3]
組氨酸標(biāo)簽蛋白染色試劑盒是重要的分子生物學(xué)技術(shù)，廣泛用于載體構(gòu)建、基因改造、蛋白質(zhì)功能研究等領(lǐng)域。但傳統(tǒng)的方法需要使用單鏈DNA模板，而得到單鏈DNA模板又需要先將基因克隆到類似M13這種載體中，操作過程冗長。
組氨酸標(biāo)簽蛋白染色試劑盒能夠通過熒光染色來特異地檢測聚丙烯酰胺凝膠中（例如，SDS-PAGE）含組氨酸標(biāo)簽的蛋白。使用該種染色試劑可以直接在膠上檢測His標(biāo)簽融合蛋白的表達(dá)，而無需進(jìn)行轉(zhuǎn)膜和蛋白免疫印跡。雖然最低檢出限依賴于所使用的紫外燈（300納米）及檢測儀器（是CCD照相機(jī)），但是該試劑盒是在過程之中評估組氨酸標(biāo)簽蛋白表達(dá)量的一種方便的方法，并且該試劑盒與后續(xù)的考馬斯染料及其它總蛋白染色方法兼容。
組氨酸標(biāo)簽蛋白染色試劑盒特點(diǎn)：
1.比蛋白免疫印跡法快兩到三倍，可以更快地得到結(jié)果并且節(jié)省珍貴的研究時(shí)間。
2.可直接在膠上檢測，無需進(jìn)行轉(zhuǎn)膜和蛋白質(zhì)免疫印跡卻可以檢測僅有0.2微克的6x組氨酸標(biāo)簽蛋白。
3.即用，含兩種試劑配方–無需混合、無需稀釋；確保了一種簡單易行、操作無錯(cuò)誤的檢測方法。
4.用于單獨(dú)、特異地檢測6x組氨酸標(biāo)簽蛋白的熒光檢測方法–檢測您希望檢測的目的蛋白(CCD照相方法可以檢測到低豐度蛋白，UV透射方法可以檢測大
量的標(biāo)簽蛋白)。
5.與各種藍(lán)色染色試劑兼容，可以特異染色6x組氨酸標(biāo)簽蛋白并且可在此后利用藍(lán)色染色試劑進(jìn)行總蛋白染色。
應(yīng)用[4][5]
用于亞氨基二乙酸修飾的共軛聚合物熒光標(biāo)記組氨酸標(biāo)簽蛋白研究
設(shè)計(jì)并合成了以聚撐苯乙炔為主鏈,在側(cè)鏈中引入IDA的負(fù)電荷共軛聚電解質(zhì)PPEIDA,并對其進(jìn)行了如下具體研究:（1）對其與金屬離子相互作用進(jìn)行了分析,在甲醇溶液中金屬離子對PPEIDA的淬滅效率要遠(yuǎn)高于在水溶液中,這是一個(gè)反常而有趣的現(xiàn)象,也正因?yàn)樵谒芤涸阪囯x子對PPEIDA的淬滅效率并不高,我們可以進(jìn)一步利用依然保持較強(qiáng)熒光的PPEIDA與鎳離子的絡(luò)合物進(jìn)行接下來的實(shí)驗(yàn)。
（2）利用FA和FRET驗(yàn)證了PPEIDA-Ni2+-His-Protein體系的可行性。FA實(shí)驗(yàn)中,PPEIDA溶液只有在有鎳離子存在時(shí)加入帶有組氨酸標(biāo)簽的蛋白才會(huì)有熒光各向異性的升高,鎳離子或者組氨酸標(biāo)簽的缺席都不能使各向異性有所改變;FRET實(shí)驗(yàn)中,也只有在鎳離子和組氨酸標(biāo)簽同時(shí)存在時(shí),PPEIDA才能向組氨酸標(biāo)簽紅色熒光蛋白進(jìn)行熒光共振能量轉(zhuǎn)移。FA和FRET實(shí)驗(yàn)均說明了鎳離子以及組氨酸標(biāo)簽對于此體系生效的不可或缺性。
（3）實(shí)際應(yīng)用PPEIDA-Ni2+-His-Protein體系。在Western Blot實(shí)驗(yàn)中利用PPEIDA與鎳離子絡(luò)合物替代一抗和二抗對組氨酸標(biāo)簽蛋白進(jìn)行成像,省去了眾多繁復(fù)的步驟,且不再依賴于專門的顯影設(shè)備,大大節(jié)省了Western Blot實(shí)驗(yàn)的時(shí)間和成本。進(jìn)一步的,我們還將此體系運(yùn)用至細(xì)胞成像,成功地用PPEIDA與的鎳離子絡(luò)合物熒光成像Hela細(xì)胞表面的組氨酸標(biāo)簽蛋白。
參考文獻(xiàn)
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