58-61-7

2946-39-6

以(2R,3R,4S,5R)-2-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-5-(羥甲基)四氫呋喃-3,4-二醇為原料，合成(2R,3R,4S,5R)-2-(6-氨基-8-溴-9H-嘌呤-9-基)-5-(羥甲基)四氫呋喃-3,4-二醇的一般步驟如下：實(shí)施例1：修飾的siRNA分子的合成涉及8-甲氧基腺苷亞磷酰胺的制備及其在胱天蛋白酶2 siRNA反義鏈中的摻入。圖7A展示了雙鏈陽性對照siRNA（SEQ ID NO:20（上鏈）和SEQ ID NO:21（下鏈））與雙鏈陰性對照siRNA（SEQ ID NO:22（上鏈）和SEQ ID NO:23（下鏈））的結(jié)構(gòu)。圖7B展示了單獨(dú)修飾的siRNA的示意圖，其中修飾包括但不限于8-丙二酰氧基腺苷、8-苯乙氧基腺苷和8-環(huán)己基乙氧基腺苷。在圖7B中，4AS對應(yīng)SEQ ID NO:24，6AS對應(yīng)SEQ ID NO:25，10AS對應(yīng)SEQ ID NO:26，15AS對應(yīng)SEQ ID NO:27。腺苷的溴化反應(yīng)在化學(xué)領(lǐng)域已有報(bào)道；通常，使用四倍過量的溴可得到約75%至82.5%的8-溴腺苷產(chǎn)率。在核-亞磷酰胺的合成過程中，為保護(hù)2'-OH基團(tuán)，首先對N'-苯甲酰腺苷的5'-OH進(jìn)行保護(hù)。隨后，使用叔丁基二甲基甲硅烷基氯（TBDMS-Cl）保護(hù)2'-OH。雖然添加Ag+離子有助于減少3'-OH的不必要反應(yīng)，但通常仍會(huì)發(fā)生副反應(yīng)，導(dǎo)致總產(chǎn)率顯著降低。因此，為提高總產(chǎn)率，采用了一種新型保護(hù)基團(tuán)二丁基甲硅烷基二硅酸酯（DTBSDT），可同時(shí)保護(hù)5'-OH和3'-OH，并使2'-OH易于被TBDMS-Cl保護(hù)。這兩個(gè)反應(yīng)基本上為一鍋反應(yīng)，避免了繁瑣的分離步驟。反應(yīng)接近定量，產(chǎn)物收率約為96%至98%（參見圖3和圖4）。在甲醇中，使用甲醇鈉試劑合成甲氧基衍生物，得到8-甲氧基腺苷衍生物及8-氧代腺苷衍生物。這兩種衍生物的分離較為復(fù)雜，所需化合物的產(chǎn)率低于50%。因此，通過使n-BuLi與過量的無水甲醇反應(yīng)，原位生成甲氧基陰離子，該反應(yīng)效率更高，所需產(chǎn)物的產(chǎn)率約為85%至93%。使用特殊的氟化物試劑HF-吡啶在零下溫度下完成5'-OH和3'-OH的脫保護(hù)。這些DMT反應(yīng)的產(chǎn)物收率較低，約為40%至50%。亞磷酰胺合成步驟的產(chǎn)物收率約為95%至98%。隨后，將8-甲氧基腺苷亞磷酰胺摻入反義鏈的第9或14位（分別對應(yīng)有義鏈的第11和6位），或同時(shí)摻入第9和14位。腺苷8位的炔丙基部分可簡化其他8位取代腺苷類似物的合成。siRNA中的8-炔丙基腺苷的炔基部分可與合適的水溶性疊氮化物通過“點(diǎn)擊”反應(yīng)，形成所需的小溝修飾。

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