"PA317 Thawing逆轉(zhuǎn)錄病毒包被的NIH3T3細胞系
細胞背景資料：胚胎；成纖維細胞；NIH Swiss
細胞形態(tài)：上皮細胞樣
PA317 Thawing逆轉(zhuǎn)錄病毒包被的NIH3T3細胞系
細胞生長：貼壁
為什么培養(yǎng)的細胞要及時傳代？體外培養(yǎng)的細胞大多具有生長接觸抑制的特性，也就是說當一個細胞被其他細胞包圍的時候，它就會停止生長，及時傳代后，細胞的生長得以繼續(xù)。培養(yǎng)細胞生長減慢的原因在哪些?其解決辦法有哪些？可能的原因有：更換了不同的培養(yǎng)液或血清；培養(yǎng)液中一些細胞生長必需成分如谷眈肢或生長因子等耗盡或缺乏或己被破壞；培養(yǎng)物中有少量細菌或真菌污染；試劑保存不當；比較新培養(yǎng)液與原培養(yǎng)液成分，比較新血清與舊血清等，找出其它可能的原因。解決辦法：增加起始培養(yǎng)細胞濃度；讓細胞逐漸適應新培養(yǎng)液；換入新鮮配制培養(yǎng)液；補加谷酷肢或生長因子等；用無抗生素培養(yǎng)液培養(yǎng)，如發(fā)現(xiàn)污染，去棄培養(yǎng)物，或用抗生素除菌；血清需保存在５℃到２０℃; 培養(yǎng)液需在２-８℃避光保存;含血清完全培養(yǎng)液在２-８℃保存，并在２周內(nèi)用完;分離培養(yǎng)物，檢測支原體。冷凍管應如何解凍？取出冷凍管后，須立即放入３７℃水槽中快速解凍，輕搖冷凍管使其在１-２分鐘內(nèi)大部分融化，特別注意，需殘留一小塊冰塊，就可拿到超凈工作臺操作細胞，用７５%酒精消毒凍存管，用新鮮培養(yǎng)基將細胞轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶。另外冷凍管由液氮桶中取出解凍時，必須注意安全，預防冷凍管爆裂。
細胞物種來源：人源或鼠源等其它物種來源
細胞產(chǎn)品包裝：復蘇形式：T２５培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式：１ml凍存管(兩支)
細胞傳代方法：１：２-１：３傳代；每周換液２-３次。
細胞凍存復蘇材料與方法步驟：常用的細胞冷凍貯存器為液氮貯存器，規(guī)格有３５L和５０L兩種。使用時要注意以下幾點：(１)一般兩周需充液氮一次，至少一個月充氮一次。液氮溫度達-１９６℃，使用時注意勿讓液氮濺到皮膚上，以免引起凍傷。(２)液氮容器為雙層結構，中間為真空層，瓶口有雙層焊接處，應防止焊接部裂開。(３)在裝入液氮時，要注意緩慢小心，并用厚紙卷筒或特制漏斗作引導，使液氮直達瓶底，如有專用液氮灌注裝置則更好。若為初次使用，加液氮時更要緩慢，以免溫度驟降而使容器損壞。細胞凍存時常備的材料有：０.２５%胰蛋白酶，含１０%～２０%的血清培養(yǎng)液，DMSO(分析純)或無色新鮮甘油(１２１°C蒸氣高壓消毒)，２mL安瓿(或?qū)Ｓ眉毎麅龃婀?、吸管、離心管、噴燈、紗布袋(或凍存管架)等。主要操作步驟為：(１)選擇處于對數(shù)生長期的細胞，在凍存前一天換液。將多個培養(yǎng)瓶中的細胞培養(yǎng) 液去掉，用０.２５%胰蛋白酶消化。適時去掉胰蛋白酶，加入少量新培養(yǎng)液。用吸管吸取培養(yǎng)液反復吹打瓶壁上的細胞，使其成為均勻分散的細胞懸液。懸浮生產(chǎn)細胞則不要消化處理。然后將細胞收集于離心管中離心(１０００r/min，１０分鐘)。(２)去上清液，加入含２０%小牛血清的完全培養(yǎng)基，于４℃預冷１５分鐘后，逐滴加入已無菌的DMSO或甘油，用吸管輕輕吹打使細胞均勻，細胞濃度為３×１０６～１×１０７/mL之間。(３)將上述細胞分裝于安瓿或?qū)Ｓ美鋬鏊芰瞎苤?，安瓿裝１～１.５mL在火焰噴燈上封口，封口處要完全封閉，圓滑無勾。冷凍管要將蓋子蓋緊，并標記好細胞名稱和凍存日期，同時作好登記(日期、細胞種類及代次、凍存支數(shù))。(４)將裝好細胞的安瓿或凍存管裝入沙布袋內(nèi);置于液氮容器頸口處存放過夜，次日轉(zhuǎn)入液氮中。采用控制降溫速度的方法也可采用下列步驟：先將安瓿置入４℃冰箱中２～３小時，再移至冰箱冷凍室內(nèi)３～４小時，再吊入液氮容器頸氣態(tài)部分存放２小時，最后沉入液氮中。細胞凍存在液氮中可以長期保存，但為妥善起見，凍存半年后，取出一只安瓿細胞復蘇培養(yǎng)，觀察生長情況，然后再繼續(xù)凍存。
細胞來源說明：細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學建系
PA317 Thawing逆轉(zhuǎn)錄病毒包被的NIH3T3細胞系
細胞生長特性：貼壁
細胞的凍存：為避免污染造成的損失，最小化連續(xù)細胞系的遺傳改變和避免有限細胞系的老化和轉(zhuǎn)化，需要凍存哺乳細胞。凍存細胞前，細胞應該特性化并檢查是否污染。有幾種普通培養(yǎng)基用來凍存細胞。對于包含有血清的培養(yǎng)基，成分可能如下：包含１０%甘油的完全培養(yǎng)基；包含１０%二甲基亞砜(DMSO)的完全培養(yǎng)基；５０%細胞條件培養(yǎng)基和５０%含有１０%甘油的新鮮培養(yǎng)基或５０%細胞條件培養(yǎng)基和５０%含有１０%二甲基亞砜的新鮮培養(yǎng)基。對于無血清培養(yǎng)基，一些普通的培養(yǎng)基成分可能是：５０%細胞條件無血清培養(yǎng)基和５０%包含有７.５%二甲基亞砜的新鮮的無血清培養(yǎng)基或包含有７.５%二甲基亞砜和１０%細胞培養(yǎng)級BSA的新鮮無血清培養(yǎng)基。懸浮細胞凍存：計數(shù)將要凍存的活細胞。細胞應該處于對數(shù)生長期。以大約２００～４００g離心５分鐘沉淀細胞，使用移液管移去上清到最小體積，不要攪亂細胞。以１×１０(７)到５×１０(７)細胞/ml密度，在包含有血清的冷凍培養(yǎng)基中再次懸浮細胞，或者以０.５×１０(７)到１×１０(７)在無血清培養(yǎng)基中，再次懸浮細胞。分裝進凍存管，將凍存管置于濕冰上或放入４℃冰箱中，５分鐘內(nèi)開始冷凍步驟。細胞以１℃/分鐘進行冷凍，可以通過可編程序的冷凍器進行或者把隔離盒中的凍存管放到-７０℃到-９０℃的冰箱中，然后轉(zhuǎn)移到液氮中貯存。貼壁細胞凍存：使用分離試劑從基層分離細胞，分離時盡可能溫和，使對細胞的損傷減少到最小。在完全生長培養(yǎng)基中，再次懸浮分離細胞，確定有活力細胞數(shù)。以大約２００g離心５分鐘沉淀細胞。使用移液管移去上清到最小體積，不要攪亂細胞。以５×１０(６)到１×１０(６)細胞/ml密度，在凍存液中懸浮細胞。分裝進凍存管，將凍存管置于濕的冰上或放入４℃冰箱中，５分鐘內(nèi)開始冷凍步驟。細胞以１℃/分鐘進行冷凍，可以通過可編程序的冷凍器進行或者把隔離盒中的凍存管放到-７０℃到-９０℃的冰箱中，然后轉(zhuǎn)移到液氮中貯存。
細胞形態(tài)特性：詳見細胞說明書
LMTK-細胞系相關產(chǎn)品：ECV細胞、MUM2B細胞、MOLM-13細胞
Human Liver-7702細胞系相關產(chǎn)品：JiyoyeP-2003細胞、ATDC5細胞、LICR-HN-6細胞
NCIH716細胞系相關產(chǎn)品：GM03573A細胞、3D4/21細胞、AMJ2C8細胞
LL/2(LLc1)細胞系相關產(chǎn)品：CHL/IU細胞、MDA-MB-361細胞、SW 1463細胞
U373MG細胞系相關產(chǎn)品：TE85細胞、C127細胞、CHP126細胞
BHP 10-3細胞系相關產(chǎn)品：W133細胞、Jurkat clone A3細胞、RPMI 1788細胞
Walker256細胞系相關產(chǎn)品：NCI-H1993細胞、kms 11細胞、624mel細胞
H-748細胞系相關產(chǎn)品：Mel624細胞、MARC 145細胞、SK-RC 39細胞
MDA-MB-435 S細胞系相關產(chǎn)品：MDA231-LM2細胞、DHL6細胞、INS1E細胞
TE13細胞系相關產(chǎn)品：H1944細胞、GM05372細胞、CT26.CL25細胞
MC3T3-E1 Subclone 4細胞系相關產(chǎn)品：RCF細胞、H184A1細胞、CAL 148細胞
NCI-H1522細胞系相關產(chǎn)品：H441細胞、GM03671細胞、SK-HEP-1細胞
SUM-52PE細胞系相關產(chǎn)品：GM01232E細胞、LLC-PK1細胞、U-226AR1細胞
MHCC97-L細胞系相關產(chǎn)品：SKCO1細胞、SACC83細胞、NCI-H2126細胞
SHSY5Y細胞系相關產(chǎn)品：H1666細胞、BGC823細胞、CTV1細胞
AM細胞系相關產(chǎn)品：HFLS-RA細胞、KYSE520細胞、REC細胞
HCT15細胞系相關產(chǎn)品：P-3J細胞、HuT 102細胞、OVCAR 8細胞
MDAMB-231細胞系相關產(chǎn)品：KTCTL140細胞、SUM 149PT細胞、PC3-M細胞
MIA-PaCa-2細胞系相關產(chǎn)品：Dakiki細胞、HSC3細胞、HCPEpiC細胞
C-28I2細胞系相關產(chǎn)品：RPPVEC細胞、H-1650細胞、NCI-H1993細胞
HCC-2185細胞系相關產(chǎn)品：hTERT RPE-1細胞、SU-DHL-8細胞、KYSE140細胞
HCC-2185細胞系相關產(chǎn)品：hTERT RPE-1細胞、SU-DHL-8細胞、KYSE140細胞
NOZ細胞系相關產(chǎn)品：H196細胞、NCI-H-69細胞、THP-1細胞
MPP-89細胞系相關產(chǎn)品：Adeno-293細胞、COLO 738細胞、IBRS2細胞
E6-1細胞系相關產(chǎn)品：FRhK-4細胞、293 c18細胞、143 B細胞
MT4細胞系相關產(chǎn)品：B6Tert-1細胞、XWLC-05細胞、MRC-5細胞
PA317 Thawing逆轉(zhuǎn)錄病毒包被的NIH3T3細胞系
4T1-LUC細胞系相關產(chǎn)品：HEL-92.1.7細胞、BT-325細胞、H650細胞
Panc 02細胞系相關產(chǎn)品：T47-D細胞、Hs675T細胞、Pan02細胞
BE2_C細胞系相關產(chǎn)品：SJRH30細胞、HN4細胞、AE1201細胞
3AO細胞系相關產(chǎn)品：TH1細胞、H711細胞、RN細胞
2B4細胞系相關產(chǎn)品：MOPC細胞、PK 15細胞、KY180細胞
ASPC1細胞系相關產(chǎn)品：HT-144細胞、TE671/RD細胞、MFM223細胞
SW480細胞系相關產(chǎn)品：HPAEpiC細胞、SK-LMS-1細胞、TK-1細胞
NCI-H2195細胞系相關產(chǎn)品：Menschliche Und Tierische Zellkulture-3細胞、HEK 293 EBNA細胞、VMCUB1細胞
BrCL12細胞系相關產(chǎn)品：LM2-4175細胞、HM06.A1細胞、EOL1細胞
M-1 myeloid leukemia細胞系相關產(chǎn)品：NCI H69細胞、H69/P細胞、RAT2細胞
UMR106細胞系相關產(chǎn)品：TGW-nu細胞、Panc203細胞、Mouse INsulinoma 6細胞
KRC-Y細胞系相關產(chǎn)品：Human Foreskin Fibroblast細胞、EAC細胞、Y3M細胞
HCAEC細胞系相關產(chǎn)品：NCIH522細胞、H.Ep.-2細胞、PLC細胞
HN 4細胞系相關產(chǎn)品：NTERA2細胞、EFM-192A細胞、NCI-H1915細胞
MC9細胞系相關產(chǎn)品：CCD1112Sk細胞、KYSE-180細胞、0V-1063細胞
WM 451-Lu細胞系相關產(chǎn)品：HCC2185細胞、H-716細胞、MKN 45細胞
H-295細胞系相關產(chǎn)品：RDES-1細胞、LOU-NH91細胞、T-cell Acute Lymphoblastic Leukemia-1細胞
OCI-LY-18細胞系相關產(chǎn)品：ROS17/2.8細胞、MCA38細胞、HCC-9724細胞
NE-4C細胞系相關產(chǎn)品：PK-136細胞、rRMECs細胞、NuTu-19細胞
NCIH841細胞系相關產(chǎn)品：C33-A細胞、HARAB細胞、NCI-SNU-761細胞
L-M (TK-)細胞系相關產(chǎn)品：Sp2/0細胞、SKGT2細胞、SKG IIIa細胞
SK_N_BE2C細胞系相關產(chǎn)品：MSTO-211 H細胞、NCI-H865細胞、NCIH2126細胞
GM04680細胞系相關產(chǎn)品：PL11細胞、KYSE270細胞、WSU-HN13細胞
FRTL5細胞系相關產(chǎn)品：HPASMC細胞、HARA-B細胞、FDCP-1細胞
PC-9S1細胞系相關產(chǎn)品：TK 10細胞、MDA-MB436細胞、RMG-I細胞
H498細胞系相關產(chǎn)品：MES-23.5細胞、NCI-H676細胞、Mel-MeWo細胞
McA-RH7777細胞系相關產(chǎn)品：H-1373細胞、SUM-149細胞、SMC-1細胞
SNGM細胞系相關產(chǎn)品：H2009細胞、RT4-D6-P2T細胞、293-FT細胞
Hs888 Lu細胞系相關產(chǎn)品：NE-4C細胞、NTERA-2 cl.D1細胞、Ca9-22細胞
D283 Med細胞系相關產(chǎn)品：253JB-V細胞、L 428細胞、BC3H1細胞
SNU-484細胞系相關產(chǎn)品：T.T細胞、KTC-1細胞、EBNA293細胞
NCI-H1299細胞系相關產(chǎn)品：COR-L23細胞、Madison 109細胞、C643細胞
PK(15)細胞系相關產(chǎn)品：SW403細胞、T/G HA-VSMC細胞、BGC823細胞
PA317 Thawing逆轉(zhuǎn)錄病毒包被的NIH3T3細胞系
H-87細胞系相關產(chǎn)品：Panc813細胞、Karpas299細胞、ZR75-30細胞
Mono-Mac-1細胞系相關產(chǎn)品：ssMCF7細胞、ATC241細胞、Normal Rat Kidney細胞
Mono-Mac-1細胞系相關產(chǎn)品：ssMCF7細胞、ATC241細胞、Normal Rat Kidney細胞
P 3 HR 1細胞系相關產(chǎn)品：SK-MEL-31細胞、Monomac-1細胞、NCI-HUT-460細胞
ZR-75-30細胞系相關產(chǎn)品：EBC-1/original細胞、SiHa細胞、EAC-E2G8細胞
SK Mel 1細胞系相關產(chǎn)品：OVCAR 5細胞、MUG-Chor1細胞、SW-579細胞
HIT T15細胞系相關產(chǎn)品：SuDHL 8細胞、DH82細胞、TCMK-1細胞
COR-L23細胞系相關產(chǎn)品：CF Pac1細胞、J774A1細胞、NFS 60細胞
COS7細胞系相關產(chǎn)品：BALB/3T3 cl. A31細胞、HR1K細胞、Vx2細胞
LC-1-sq細胞系相關產(chǎn)品：RH35細胞、P30OHK細胞、Panc_03_27細胞
HCC-1395細胞系相關產(chǎn)品：SCaBER細胞、MOLP8細胞、HO1-N1細胞
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