"VMM5A Adherent人黑色素瘤細胞系
細胞背景資料：黑色素瘤；神經節(jié)轉移；男性
細胞形態(tài)：上皮細胞樣
細胞復蘇相關注意事項：１.取細胞的過程中注意帶好防凍手套，護目鏡。此項尤為重要，細胞凍存管可能漏入液氮，解凍時凍存管中的氣溫急劇上升，可導致爆炸。２.凍存液的問題：凍存液的配置已是常識，在這里不作詳述，但二甲基亞砜(DMSO )對細胞不是完全無毒副作用，在常溫下，二甲基亞砜對細胞的毒副作較大，因此，必須在１-２min內使凍存液完全融化。如果復蘇溫度太慢，會造成細胞的損傷，二甲基亞砜(DMSO)選擇進口產品。３.離心前須加入少量培養(yǎng)液。細胞解凍后二甲基亞砜濃度較高，注意加入少量培養(yǎng)液可稀釋其濃度，以減少對細胞的損傷。４.離心問題：目前主要有兩種見解。一種是解凍后的細胞懸液直接吹打均勻后分裝到培養(yǎng)瓶中進行培養(yǎng)，第二天換液。因為離心的目的是兩個，去除DMSO，去除死細胞，這個是標準流程，但對一般人來說，把握不好離心轉速和時間，轉的不夠活細胞沉底的少，細胞就全被扔掉了，轉過了活細胞會受壓過大，死亡。此外在操作過程中容易污染，所以不推薦。另一種說法為細胞懸液中含有二甲基亞砜(DMSO)，DMSO對細胞有一定的毒副作用，所以須將離心后的液體前倒凈，且一定倒干凈。我在試驗中按照常規(guī)的離心分裝的方法進行復蘇，結果無異常。５.細胞貼壁少的問題：教科書中說明凍存細胞解凍時１ml細胞液要加１０ml-１５ml培養(yǎng)液，而在我的試驗中的經驗總結為培養(yǎng)基越少細胞越容易貼附。６.復蘇細胞分裝的問題：試驗中我的經驗總結為復蘇１管細胞一般可分裝到１-２只培養(yǎng)瓶中，分裝過多，細胞濃度過低，不利于細胞的貼壁。７.加培養(yǎng)基的量放入問題：這個量的多少的把握主要涉及到的問題DMSO的濃度，從如果你加培養(yǎng)基的太少，那么DMSO的濃度就會比較大，就會影響細胞生長，從以前的資料來看，DMSO的濃度在小于０.５%的時候對一般細胞沒有什么影響，還有一個說法是１%。所以如果你的凍存液的濃度是１０%DMSO的話那么加１０ml以上的培養(yǎng)基就恰好稀釋到了無害濃度。
細胞生長：貼壁
細胞物種來源：人源或鼠源等其它物種來源
VMM5A Adherent人黑色素瘤細胞系
細胞產品包裝：復蘇形式：T２５培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式：１ml凍存管(兩支)
細胞傳代的一般方法：開始細胞傳代前，仔細檢查細胞傳代所需的儀器和試劑是否齊全：一般主要有：細胞(單層細胞，鏡檢適合)、培養(yǎng)液(MEM-０.２%LH培養(yǎng)液或MEM培養(yǎng)液或１９９等適合細胞有要求的培養(yǎng)液)、滅活小牛血清、慶大霉素溶液（１萬單位）、７.５％NaHC０３溶液、０.２５％胰蛋白酶、PBS洗液。用具：小方瓶(１００m１)、克氏瓶、膠塞、吸管(１０ml、１m１）、細胞吹打管（２０ml）(以上用具需經１２１℃至少１５分鐘高壓滅菌)、C０２ 孵箱、超凈臺、倒置顯微鏡、４℃、-２０℃冰箱；操作步驟：鏡檢細胞，挑選生長狀態(tài)良好，細胞界限清晰，具有立體感，形態(tài)好無污染、無異常及可疑病變細胞。配制細胞培養(yǎng)液：按以下配比配制MEM-０.２%LH培養(yǎng)液１００ml內，加入滅活小牛血清１０m１，慶大霉素溶液０.３m１，７.５%碳酸鈉溶液３ml。（僅供一般參考）。消化細胞；先用PBS洗液沖洗細胞表面１-２次，每次１０m１，棄去洗液，向細胞瓶內加入０.２５％胰蛋白酶溶液，每瓶１m１，細胞瓶平放，使消化液完全覆蓋細胞表面。至細胞完全脫落到胰酶中。每瓶加入１０m１細胞培養(yǎng)液吹打分散細胞，按所需的傳代比例分裝于小方瓶(１００m１)中，再加入１０m１細胞培養(yǎng)液重復吹打一次后分裝，然后補加至所需培養(yǎng)量。加塞，置于３７±１℃孵箱培養(yǎng)。約２～４天成片。(由細胞接種濃度決定)；填寫傳代記錄。
NCI-H292細胞系相關產品：FC33細胞、GM04671細胞、Eca-109細胞
LNCaP C4-2B細胞系相關產品：EB1細胞、HCE細胞、MAD109細胞
TF1細胞系相關產品：NB1-RGB細胞、SHEP1細胞、BetaTC6細胞
細胞傳代方法：１：２-１：３傳代；每周換液２-３次。
細胞來源說明：細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數國外著名大學建系
NE1-E6E7細胞系相關產品：SNU668細胞、H-1105細胞、MOLT 4細胞
SW-756細胞系相關產品：CD-18細胞、H250細胞、PTK2細胞
HCC95細胞系相關產品：RN-c細胞、Neuro-2a細胞、SV-HUC細胞
細胞生長特性：貼壁
VMM5A Adherent人黑色素瘤細胞系
細胞形態(tài)特性：詳見細胞說明書
培養(yǎng)細胞真的不難，最關鍵幾點：１)所有的東西使用，如果你用的血清、培養(yǎng)皿、培養(yǎng)基、胰酶什么的都是進口的，真的很難相信你會把細胞養(yǎng)壞；２)動作要快，胰酶消化，換液什么，細胞暴露在空氣中的時間越少越好。另外，要掌握好胰酶消化時間，所謂的細胞狀態(tài)差，很多時候是傳代的原因；３)有時間的話，需要細胞計數，傳相應數目的細胞到培養(yǎng)皿中，可以大致清楚細胞的生長曲線，不會臨時要處理，手足無措；４)要做什么心里要非常清楚，合理安排時間，傳代細胞的實驗穿插進行，可以節(jié)省很多時間，也不會耽誤別人的實驗；５)個人的實驗器具自己收一套，不要和別人混用，最近換了什么新的東西稍微記一下，試劑一旦懷疑污染，馬上丟；６)傳代細胞不能進去太多人，避免相互干擾。每天對待細胞比孝敬爹媽還用心，那真是捧在手里怕碎了，含在嘴里怕化了，看在眼里怕丟了，培養(yǎng)細胞時有哪些經驗教訓可以分享呢?１)嚴格無菌操作，多噴噴酒精，要是對滅菌的東西不放心，自己包自己送自己烘干；２)不要和別人共用試劑耗材，自己準備一套；３)有可能的話在拿到新細胞的時候做好支原體衣原體檢測；４)水浴鍋很臟，生化培養(yǎng)箱要是得手動加濕的話盤里的水也會很臟，勤換(滅菌水加進去)；５)晚上離開的時候給傳代細胞照紫外，超凈臺是用完就開；６)是同一時間就你一個人在用傳代細胞在養(yǎng)細胞。
M.D. Anderson-Prostate Cancer-2b細胞系相關產品：1E8-H細胞、H548細胞、Panc-03.27細胞
WILL-2細胞系相關產品：Baby Hamster Kidney from litter No. 21細胞、BMF細胞、NCIH2172細胞
LAPC4細胞系相關產品：EVSAT細胞、SNU886細胞、Bovine ENDometrial cells細胞
F442-A細胞系相關產品：MOLT-16細胞、DH 82細胞、UCLA-SO-M14細胞
OCUM-1細胞系相關產品：MDA-MB-157細胞、NCI-H1666細胞、HEK (AD293)細胞
MDA-MB468細胞系相關產品：MDA MB 453細胞、A375S2細胞、U-343MG細胞
HCC0015細胞系相關產品：COV434細胞、IBMF-7細胞、IMCD-3細胞
hSCC-25細胞系相關產品：SF 295細胞、K1735細胞、HDF-a細胞
DiFi細胞系相關產品：SUDHL10細胞、MLM細胞、8305C細胞
A 2058細胞系相關產品：SK-N-BE2C細胞、G-292, clone A141B1細胞、LS 174 T細胞
LA-N-6細胞系相關產品：NCIH1781細胞、HLEC-SRA 01/04細胞、KLN 205細胞
C33細胞系相關產品：2B4細胞、B16-F10--RED細胞、MNNG-HOS (TE 85, clone F-5)細胞
526 mel細胞系相關產品：RTE細胞、293-EBNA細胞、Biologics Standards-Cercopithecus-1細胞
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TCCSUP細胞系相關產品：DiFi細胞、FOX-NY細胞、KYSE-70細胞
Stanford University Pediatric T-cell line 1細胞系相關產品：SK-MES1細胞、P3.653細胞、Human Embryonic Skin細胞
LAD 2細胞系相關產品：GC-1細胞、SN4741細胞、Hs 746T細胞
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MKN1細胞系相關產品：MDCK2細胞、KLN-205細胞、Ly3細胞
CHP 100細胞系相關產品：PANC3.27細胞、RWPE-1細胞、Hs-611-T細胞
OCI-AML-3細胞系相關產品：HS-294T細胞、MHCC-97細胞、UMUC3細胞
GA-10 (Clone 4)細胞系相關產品：JM細胞、CEM細胞、KMY1022細胞
SW-1222細胞系相關產品：SEG1細胞、GTL 16細胞、RCK-8細胞
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PLB985細胞系相關產品：Pro-5WgaRI3C細胞、P30-OHKUBO細胞、Panc-05.04細胞
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University of Michigan-Urothelial Carcinoma-14細胞系相關產品：Fortner's melanotic melanoma #3細胞、3T3-442A細胞、HCCC9810細胞
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KE-39細胞系相關產品：Hs706T細胞、SUP-B1細胞、T47D:A細胞
NS1/1-Ag4.1細胞系相關產品：JEG-3細胞、SW 839細胞、MCF-7ADR細胞
R1800[RA]細胞系相關產品：EFM-192A細胞、NCI H716細胞、NCI-SNU-398細胞
BL-6細胞系相關產品：CAL62細胞、Hs729細胞、HemECs細胞
MUM2B細胞系相關產品：EL4細胞、H-187細胞、KP-N-RT-BM-1細胞
LM(TK-)細胞系相關產品：HCC0015細胞、373 MG細胞、B/C3T3細胞
Los Angeles Prostate Cancer-4細胞系相關產品：SF295細胞、HKBML細胞、HRVEC細胞
EC109細胞系相關產品：Ra No. 1細胞、Institute for Medical Research-90細胞、COLO678細胞
H1355細胞系相關產品：NBL-3細胞、SN-12C細胞、NCI-H250細胞
WM-115細胞系相關產品：NCIH1944細胞、MHHCALL2細胞、SK-BR-3細胞
H748細胞系相關產品：MJ細胞、H-2009細胞、CAL 27細胞
MDA-453細胞系相關產品：JCA1細胞、CHP-100細胞、Caco-2/BBe 1細胞
MT-3 [Human leukocytes]細胞系相關產品：PAMC82細胞、Hs 729T細胞、RPMI 8226/S細胞
CF PAC-1細胞系相關產品：WSU-DLCL(2)細胞、NCI-H841細胞、TE12細胞
HCC-1569細胞系相關產品：WSUDLCL2細胞、AN3 CA細胞、Hs606T細胞
MC3T3-E1(C4)細胞系相關產品：FHCRC subclone 11細胞、PC 61.5.3細胞、P388D1細胞
NRK 49F細胞系相關產品：MCA205細胞、YAC-1細胞、T-CAM2細胞
L6細胞系相關產品：SKCO 1細胞、DU4475細胞、Michigan Cancer Foundation-12F細胞
Colo16細胞系相關產品：HBMEC細胞、NCIH520細胞、Wills Eye Research Institute-Retinoblastoma-1細胞
RT4-D6-P2T細胞系相關產品：CAKI.1細胞、H-2196細胞、AR-42J細胞
DU-4475細胞系相關產品：HCC1359細胞、CCD 841 CoTr細胞、HSKMC細胞
H-2444細胞系相關產品：CAL85-1細胞、PA-1細胞、NCI-H1341細胞
JHH-2細胞系相關產品：MRC-9細胞、LP1細胞、IM95細胞
Hs27F細胞系相關產品：LWnt3A細胞、IPLB-Sf21-AE細胞、HLEpiC細胞
B16-F10-BL6細胞系相關產品：OVCAR.4細胞、Rat Lung Epithelial-6-T-antigen Negative細胞、NP69細胞
SW837細胞系相關產品：MRC 5細胞、293AD細胞、EBC-1細胞
NCIH211細胞系相關產品：NIH:OVCAR-10細胞、MDA-361細胞、NCI-H740細胞
Molm 14細胞系相關產品：M-O7e細胞、HCO細胞、38C-13細胞
VMM5A Adherent人黑色素瘤細胞系
IPLB-Sf21AE細胞系相關產品：NCI-H378細胞、NCI-SNU-520細胞、hFOB細胞
University of Michigan-Renal Carcinoma-2細胞系相關產品：HT 1376.T細胞、OVCAR 433細胞、PANC 1005細胞
SKRC 39細胞系相關產品：JM1細胞、HOCF細胞、NCI H69細胞
CCD966SK細胞系相關產品：KYSE-150細胞、Hs821T細胞、YD38細胞
PG-LH7細胞系相關產品：RSMC細胞、T/GHA-VSMC細胞、CAL 78細胞
NBL-2細胞系相關產品：NPC-039細胞、Farage Original Line細胞、EFM192B細胞
RPMI 2650細胞系相關產品：JIMT細胞、HuLEC-5a細胞、H-735細胞
MS1細胞系相關產品：H1522細胞、MS-751細胞、YES-2細胞
Hs 746T細胞系相關產品：APRE-19細胞、KHYG1細胞、EnCa1細胞
HT 1080細胞系相關產品：KG1A細胞、SKOV-433細胞、SW-480細胞
HSC 3細胞系相關產品：P1-Raji細胞、IR983F細胞、NCI-H650細胞
LAPC4細胞系相關產品：EVSAT細胞、hTERT-RPE細胞、JROECL 33細胞
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