"GEO epithelioid cells人結(jié)腸癌細胞系 細胞背景資料:結(jié)腸癌 細胞形態(tài):上皮細胞樣 細胞復(fù)蘇后貼壁細胞較少的問題分析:總結(jié)1:復(fù)蘇過程沒有問題,是否是從液氮拿出直接放入溫水,還有培養(yǎng)箱,二氧化碳濃度,培養(yǎng)基、PH值等環(huán)節(jié)。要么加高濃度FBS 15-20%,看看能否幫助貼壁,當然也需要考慮血清問題,還有確信拿來的細胞沒問題??偨Y(jié)2:首先應(yīng)該懷疑凍存,實際上復(fù)蘇出問題的可能非常小,因為操作簡單,而且死板。1、你凍存的時候是不是消化的時間過長,這是一般人所注意不到的,即使書上也不講這個問題,太長的消化時間會讓細胞復(fù)蘇時失去貼壁能力,表現(xiàn)為先貼后死,原因是在你復(fù)蘇的時候細胞已進入凋亡程序,不可逆轉(zhuǎn)的死亡。2、你的凍存液好不好,是什么,甘油還是DMSO,質(zhì)量非常重要,否則也會死亡。3、你的凍存液的量加的是不是太多,ATCC推薦是不超過7%,大于5%,太多也不好。4、你在凍存的時候是不是把DMSO混均勻,這個有一些影響,但不算太大。5、你的凍存是否按部就班,就是所溫度梯度是不是把握嚴格,很多人容易忘卻這個事情,因為這個東西流程長。6、如果你細胞污染,你是否能很快看到,我比我的導(dǎo)師能早一天看到污染。從這個角度講建議去除離心這步。7、你的細胞在凍存前是否過密。還有,不贊成孵箱污染這個概念的,所有在一個孵箱里的細胞都污染一個細菌的話,這個細菌是源于孵箱的,但這不代表孵箱污染,因為孵箱無論你如何處理都有大量的細菌,問題在操作。每次污染的原因都要盡可能的找,以后就不犯同樣的問題,這個很重要,不能靠猜,否則你就有可能細胞養(yǎng)絕最后換課題,這個見得太多了,別不當會事。 NCI747細胞系相關(guān)產(chǎn)品:N87細胞、KYSE0520細胞、NCI-H735細胞 KHYG細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Cates 1B細胞、OVCAR8/ADR細胞、H2172細胞 H-1155細胞系相關(guān)產(chǎn)品:143BTK-細胞、LN 229細胞、hADSCs細胞 細胞生長:貼壁 GEO epithelioid cells人結(jié)腸癌細胞系 細胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 細胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 細胞傳代的一般方法:開始細胞傳代前,仔細檢查細胞傳代所需的儀器和試劑是否齊全:一般主要有:細胞(單層細胞,鏡檢適合)、培養(yǎng)液(MEM-0.2%LH培養(yǎng)液或MEM培養(yǎng)液或199等適合細胞有要求的培養(yǎng)液)、滅活小牛血清、慶大霉素溶液(1萬單位)、7.5%NaHC03溶液、0.25%胰蛋白酶、PBS洗液。用具:小方瓶(100m1)、克氏瓶、膠塞、吸管(10ml、1m1)、細胞吹打管(20ml)(以上用具需經(jīng)121℃至少15分鐘高壓滅菌)、C02 孵箱、超凈臺、倒置顯微鏡、4℃、-20℃冰箱;操作步驟:鏡檢細胞,挑選生長狀態(tài)良好,細胞界限清晰,具有立體感,形態(tài)好無污染、無異常及可疑病變細胞。配制細胞培養(yǎng)液:按以下配比配制MEM-0.2%LH培養(yǎng)液100ml內(nèi),加入滅活小牛血清10m1,慶大霉素溶液0.3m1,7.5%碳酸鈉溶液3ml。(僅供一般參考)。消化細胞;先用PBS洗液沖洗細胞表面1-2次,每次10m1,棄去洗液,向細胞瓶內(nèi)加入0.25%胰蛋白酶溶液,每瓶1m1,細胞瓶平放,使消化液完全覆蓋細胞表面。至細胞完全脫落到胰酶中。每瓶加入10m1細胞培養(yǎng)液吹打分散細胞,按所需的傳代比例分裝于小方瓶(100m1)中,再加入10m1細胞培養(yǎng)液重復(fù)吹打一次后分裝,然后補加至所需培養(yǎng)量。加塞,置于37±1℃孵箱培養(yǎng)。約2~4天成片。(由細胞接種濃度決定);填寫傳代記錄。 細胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次。 SK-MEL3細胞系相關(guān)產(chǎn)品:D283MED細胞、MDA-MB231細胞、PaTu 8988s細胞 TOV21細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-1563細胞、MDA-231細胞、OCI-Ly18細胞 Normal Rat Kidney細胞系相關(guān)產(chǎn)品:526 mel細胞、HVSMC細胞、Hepa-RG細胞 MHCC97-L細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SKCO1細胞、SACC83細胞、NCI-H2126細胞 TE13細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H1944細胞、GM05372細胞、CT26.CL25細胞 細胞來源說明:細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學(xué)建系 GEO epithelioid cells人結(jié)腸癌細胞系 細胞生長特性:貼壁 細胞形態(tài)特性:詳見細胞說明書 細胞培養(yǎng)實驗中常見問題總結(jié):1)一般客戶拿到細胞后,應(yīng)該注意什么?客戶收到細胞后先不開蓋,放在培養(yǎng)箱靜置若干小時后(看細胞密度而定)在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議受收細胞后觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,顯微鏡下拍細胞100X,200X各一張),排除細胞本身污染的情況;收到細胞未開封,出現(xiàn)污染狀況我們負責(zé)免費發(fā)送一株細胞。收到細胞時如無異常情況,請在顯微鏡下觀察細胞密度,如為貼壁細胞,未超過80%匯合度時,將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液吸出,留下10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng);超過80%匯合度時,請按細胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細胞,吸出培養(yǎng)液、1000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘,吸出上清,管底細胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細胞后移回培養(yǎng)瓶。細胞消化液建議使用PBS配制,慎用Hanks液配制;2)快遞細胞多久能到,是寄凍存的細胞還是復(fù)蘇好的細胞?我們采用快遞發(fā)貨,一般外地2--3天,寄細胞前請確認當?shù)販囟?,如果氣溫低于4度的,則采用郵寄凍存細胞;3)可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基?不能。每一細胞株均有其特定使用且已適應(yīng)之細胞培養(yǎng)基,若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基,細胞大都無法立即適應(yīng),造成細胞無法存活;4)可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之血清種類?不能。血清是細胞培養(yǎng)上一個極為重要的營養(yǎng)來源,所以血清的種類和品質(zhì)對于細胞的生長會產(chǎn)生極大的影響。來自不同物種的血清,在一些物質(zhì)或分子的量或內(nèi)容物上都有所不同,血清使用錯誤常會造成細胞無法存活。 WRL68細胞系相關(guān)產(chǎn)品:D-283細胞、H-2107細胞、LC-2/ad細胞 C32-mel細胞系相關(guān)產(chǎn)品:GLAG-66細胞、huH 1細胞、WEHI-279細胞 RCC4細胞系相關(guān)產(chǎn)品:KM933細胞、NCI-SNU-423細胞、HEK 293-F細胞 Epstein-Barr-2細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HK2細胞、MLTC-1細胞、SKMES細胞 Mono-Mac-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:ssMCF7細胞、ATC241細胞、Normal Rat Kidney細胞 RMS1598細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH1355細胞、T2細胞、Ramos 1細胞 Ly18細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH28細胞、TC-1 [Mouse lung]細胞、P3.times.63 Ag8.653細胞 SW1463細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H69細胞、SF539細胞、TE1細胞 FAO-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:LS 174 T細胞、CORL23細胞、NCI-H2330細胞 OVCA 420細胞系相關(guān)產(chǎn)品:IOSE 80細胞、RT-112細胞、NK92MI細胞 GEO epithelioid cells人結(jié)腸癌細胞系 Mouse Bladder Tumor line-2細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NPA87-1細胞、Porcine Kidney-15細胞、IPLB-SF-21細胞 OLN-93細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SRA 01/04細胞、C3H/10T1/2細胞、NS1/1-Ag4.1細胞 OVCAR10細胞系相關(guān)產(chǎn)品:U 937細胞、LS-180細胞、SAOS 2細胞 SKG-IIIa細胞系相關(guān)產(chǎn)品:IOSE80細胞、BC-019細胞、H-2196細胞 EOMA細胞系相關(guān)產(chǎn)品:P3/NSI/1-AG4-1細胞、OB2細胞、H-548細胞 NCI-H1838細胞系相關(guān)產(chǎn)品:A3細胞、Strain V細胞、B16細胞 NCI-H1838細胞系相關(guān)產(chǎn)品:A3細胞、Strain V細胞、B16細胞 PE/CA-PJ-34細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SK-OV-433細胞、SUM52細胞、S-16細胞 LNCaP FGC細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H446細胞、SMC-1細胞、H1092細胞 D-407細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HTR-8細胞、138 MG細胞、SNU1040細胞 HFTF細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HeLa細胞、AX-Mel細胞、NCIH1048細胞 NOMO1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Keio University-19-19細胞、Evsa T細胞、Kit 225 K6細胞 LC-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H1836細胞、JB6 clone 30, subclone 7b細胞、CO115細胞 Rat Basophilic Leukemia-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Sp2/O-Ag14細胞、PG-LH7細胞、CAL-27細胞 McG-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Y3.AG.1.2.3細胞、HPDEC細胞、ECV-304細胞 NCI-H1395細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-HUT-520細胞、MESSA細胞、H-748細胞 Hs600T細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SNK1細胞、Hs832T細胞、U20-S細胞 KBM-7細胞系相關(guān)產(chǎn)品:KY-50細胞、GS-9L細胞、SK-N-MC細胞 TE671細胞系相關(guān)產(chǎn)品:AU-Mel細胞、SK.MEL.28細胞、Y3.AG.1.2.3細胞 TE671細胞系相關(guān)產(chǎn)品:AU-Mel細胞、SK.MEL.28細胞、Y3.AG.1.2.3細胞 NB-4細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-HUT-125細胞、HCC-1438細胞、HT clone H9細胞 PE CA PJ34細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-716細胞、H-2286細胞、U-hth74細胞 RPMI-8226細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Human Epithelioma-2細胞、CCRF-CEM細胞、Turbot Embryonic Cell line細胞 MDAMB134細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HIT.T15細胞、Panc-10.05細胞、Nittby-Salford 1細胞 Fetal Human Lens-124細胞系相關(guān)產(chǎn)品:bEnd.3[BEND3]細胞、A375-S2細胞、A-431細胞 PA-TU S細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H322T細胞、IMR 32細胞、NCI-ADR-RES細胞 GM07404D細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H1838細胞、NS20Y細胞、KP2細胞 Bat lung細胞系相關(guān)產(chǎn)品:LTEP-sm細胞、SHI1細胞、H-187細胞 TE-10細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NGEC細胞、SK-N-BE(2)-C細胞、SUPB-15細胞 BHT-101細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MSTO211H細胞、DV-90細胞、JeKo 1細胞 SUDHL4細胞系相關(guān)產(chǎn)品:3T3-Swiss albino細胞、MPC-11細胞、GM0637細胞 bEnd3細胞系相關(guān)產(chǎn)品:OCI-LY-7細胞、T 98 G細胞、HEL9217細胞 NCI-H747細胞系相關(guān)產(chǎn)品:C 6細胞、BIC-1細胞、MDAMB134VI細胞 H-1688細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MDA330細胞、LLC-PK-1細胞、Moorfields/Institute of Ophthalmology-Muller 1細胞 SNT8細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CCD33Co細胞、OCI-LY-10細胞、HP615細胞 Hep-G2細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Emory University-2細胞、FK81細胞、CCC-HSF-1細胞 4-1st細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Stanford University-Diffuse Histiocytic Lymphoma-5細胞、HL 60細胞、NCI H548細胞 HSC 3細胞系相關(guān)產(chǎn)品:P1-Raji細胞、YES2細胞、SNU368細胞 4T1-A細胞系相關(guān)產(chǎn)品:KU-812細胞、IMR 90細胞、OVCA5細胞 RWPE1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Walker-256細胞、mIMCD3細胞、P3-X63-Ag8.653細胞 SKGIIIA細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Strain L-929細胞、MDAMB415細胞、H1672細胞 EAhy 926細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SU86_86細胞、SK-MES-1細胞、huH 1細胞 TE354T細胞系相關(guān)產(chǎn)品:A2008細胞、RPMI6666細胞、PANC 813細胞 C3H/10T1/2-clone8細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MSF細胞、SW-962細胞、NSC-34細胞 3T3 clone A31細胞系相關(guān)產(chǎn)品:EC-109細胞、NB-4細胞、BDCM細胞 PL5細胞系相關(guān)產(chǎn)品:PSN-1細胞、JM-Jurkat細胞、SK-N-FI細胞 BEL7402細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Radiation Effects Research Foundation-Lung Cancer-MS細胞、2PK3細胞、Potorous tridactylus Kidney 2細胞 NCM460細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Metastatic Variant 522細胞、Panc-02細胞、NCI-H774細胞 MH-22a細胞系相關(guān)產(chǎn)品:High-5細胞、NCI-H2286細胞、P3-NS1/1Ag 4.1細胞 Hs695細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NB4細胞、C-33-A細胞、M109細胞 A549ATCC細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-1435細胞、SJCRH30細胞、RGB細胞 GEO epithelioid cells人結(jié)腸癌細胞系 WERI-Rb-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HDLM-2細胞、RT112細胞、UM-UC-1細胞 JS1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:786-O RCC細胞、Dx5細胞、SUP-M2細胞 LAC細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SGC 7901細胞、RPMI no. 8226細胞、OVCAR420細胞 RCC4細胞系相關(guān)產(chǎn)品:KM933細胞、HOP 92細胞、Hs 578.T細胞 "
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