活性氧檢測試劑盒(DHE熒光探針法)
中文名稱:活性氧檢測試劑盒(DHE熒光探針法)
英文名稱:ROS detection kit(DHE probe)
產(chǎn)品規(guī)格:200T
本試劑盒是一種利用熒光探針DHE(Dihydroethidium)進行活性氧檢測的試劑盒??梢杂糜诟鞣N真核培養(yǎng)細胞、培養(yǎng)或灌流組織及組織冰凍切片的檢測,提供了活性氧陽性對照試劑,以便于活性氧的檢測。 DHE可自由透過活細胞膜進入細胞內(nèi),并被細胞內(nèi)的ROS氧化,形成氧化乙啶;氧化乙啶可摻入染色體DNA中,產(chǎn)生紅色熒光。根據(jù)活細胞中紅色熒光的產(chǎn)生,可以判斷細胞ROS含量的多少和變化。二氫乙啶在細胞內(nèi)主要被超氧陰離子型ROS氧化,用流式細胞儀或熒光顯微鏡可直接觀察,是一種快速簡便的組織或培養(yǎng)活細胞中ROS經(jīng)典檢測方法。在激發(fā)波長535nm,發(fā)射波長610nm附近,使用熒光顯微鏡、激光共聚焦顯微鏡、熒光分光光度計、熒光酶標儀、流式細胞儀等檢測熒光,從而測定細胞內(nèi)活性氧水平。 活性氧(Reactive oxygen species, ROS) 包括超氧自由基、過氧化氫、及其下游產(chǎn)物過氧化物和羥化物等,參與細胞生長增殖、發(fā)育分化、衰老和凋亡以及許多生理和病理過程。 產(chǎn)品特點: · 使用方便:可用激光共聚焦顯微鏡直接觀察、熒光分光光度計、熒光酶標儀或流式細胞儀檢測; · 背景低,靈敏度高; · 線性范圍寬,使用方便。 試劑盒組成:
保存條件:-20℃避光,有效期6個月 自備試劑和儀器: · 培養(yǎng)基 · 移液器及吸頭 · 離心機 · 激光共聚焦顯微鏡或熒光分光光度計或酶標儀或流式細胞儀,激發(fā)波長535nm,發(fā)射波長610nm。 使用注意事項: 1.螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心,將蓋內(nèi)壁上的液體收集至管底,避免開蓋時液體灑落。 2.熒光探針標記后,一定要洗凈殘余的未進入細胞內(nèi)的探針,否則會導(dǎo)致背景較高。 3.探針標記完畢并洗凈殘余探針后,可以進行激發(fā)波長的掃描和發(fā)射波長的掃描,以確認探針的標記情況是否正常。 4.盡量縮短探針標記后到測定所用的時間,以減少各種可能的誤差。 5.對于藥物作用時間較短(2小時以內(nèi))的細胞,先標記探針,后用藥物刺激細胞。對于藥物作用時間較長(6小時以上)的細胞,先用活性氧陽性對照誘導(dǎo)劑或相應(yīng)的藥物刺激細胞,后標記探針。 6.陽性對照誘導(dǎo)劑可以按照1:1000 的比例使用。例如標記好探針的細胞共1ml,可以加入1μl的陽性對照誘導(dǎo)劑刺激。通常刺激后20-30 分鐘內(nèi)可以觀察到非常顯著的活性氧水平升高。對于不同的細胞,活性氧陽性對照的效果可能有較大的差別。如果在刺激后30 分鐘內(nèi)觀察不到活性氧的升高,可以適當提高活性氧陽性對照誘導(dǎo)劑的濃度。如果活性氧升高得過快,可以適當降低活性氧陽性對照誘導(dǎo)劑的濃度。 7.DHE在光照和空氣中易被氧化,注意避光密封保存。 8.對不同的細胞和組織,應(yīng)選擇合適的孵育時間和濃度,以觀察ROS的變化。 使用方法: DHE探針標記: 1.DHE 溶液可在新鮮培養(yǎng)液、緩沖鹽溶液或組織灌流液中稀釋到所需濃度,100~1000倍稀釋,以此染色液更換細胞培養(yǎng)液或灌流液;也可直接向細胞孵育液體或灌流液中加入DHE探針溶液至所需濃度。 2.依據(jù)細胞ROS含量的不同,DHE 終濃度可選擇在100-1000倍稀釋的范圍,孵育時間可選擇10~90分鐘,在37℃或室溫進行避光孵育。 3.孵育結(jié)束后,用新鮮溶液清洗細胞或組織。 熒光顯微鏡檢測: 1.對貼壁生長細胞或活組織,可直接在熒光顯微鏡下觀察;對懸浮生長細胞,取25~50μl細胞懸液滴到一張顯微載玻片上,再蓋上一張蓋玻片。 2.熒光顯微鏡下,用藍光或綠光激發(fā),觀察和拍攝細胞紅色發(fā)射圖像,ROS陽性細胞在整個核區(qū)被染成紅色;用紫外光激發(fā)時,胞漿中未氧化的二氫乙啶可發(fā)出藍色熒光。 流式細胞儀分析: 1.對貼壁生長細胞,用胰酶消化制備成單細胞懸液;對懸浮生長細胞,直接收集細胞。用0.5~1 ml 冰冷PBS 重懸細胞(5~10萬)。 2.采用480~535nm 波長激發(fā),測定590nm~610nm 以上的發(fā)射,細胞應(yīng)可分成兩個亞群:ROS陰性細胞僅有很低的熒光強度,ROS陽性細胞有較強的紅色熒光。
特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!
上海澤葉生物科技有限公司
聯(lián)系商家時請?zhí)峒癱hemicalbook,有助于交易順利完成!
上海澤葉生物