Gel-Green (EB升級換代產品, 10000X)

信裕生物的Gel-Green(凝膠綠)核酸染料是一種EB (Ethidium bromide，溴化乙錠)的升級換代產品，用于凝膠中DNA、RNA等核酸的染色。Gel-Green具有安全(未檢測到致突變性和細胞毒性)、靈敏度高、穩(wěn)定性好等優(yōu)點，凝膠中的核酸在使用本產品后經約500nm波長藍光(也可以使用約260nm紫外光)激發(fā)呈現綠色熒光，適用于原先使用SYBR Green或SYBR Gold為核酸染料的凝膠成像和檢測系統(tǒng)。
由于Gel-Green在500nm左右處有的激發(fā)波長，可以使用對人體無害的藍光燈或藍光成像儀進行核酸檢測，從而避免常規(guī)的紫外檢測對核酸樣品的致突變性，以及紫外對人的眼睛和皮膚的傷害。特別在切膠回收時，使用Gel-Green并用藍光燈具有很大的優(yōu)勢，不僅可以避免核酸樣品的突變，也可以避免紫外光對人體的傷害。
Gel-Green比EB或SYBR Green更安全。Gel-Green在遠高于其工作濃度范圍時均沒有細胞毒性及誘變性。艾姆斯氏試驗(Ames test)結果表明，即使在S9代謝活化時，也沒有檢測到致突變性。Gel-Green和信裕生物另外一種安全型核酸染料Gel-Red，由于它們特殊的化學結構使其難以進入細胞，從而大大降低甚至避免了染料的致突變性和細胞毒性。艾姆斯氏試驗結果表明，Gel-Green比Gel-Red更安全，即便在S9代謝活化時，當Gel-Green濃度高達約20微克/毫升時，也沒有檢測到致突變性。而SYBR Green染料可以穿透細胞膜，進入活細胞并染色DNA。并且有報道SYBR Green可以強烈增強紫外線誘導的基因突變。
Gel-Green檢測靈敏度高，對于小分子量核酸的染色效果好。Gel-Green的檢測靈敏度比EB高8-10倍，在檢測低濃度、微量DNA或RNA方面比EB更佳，尤其對小分子量的DNA檢測非常靈敏。在使用浸泡染色法時，Gel-Green和SYBR Gold的靈敏度相近甚至更高；與SYBR Gold不同的是，Gel-Green預先配制在凝膠中也有很高的靈敏度。EB對于小分子量核酸染色效果差，而Gel-Green對于小分子量核酸的染色效果很好，便于觀察酶切或PCR獲得的小分子量核酸片段。本說明書推薦使用的Gel-Green濃度，其檢測效果略優(yōu)于EB。如果希望獲得更高的染色靈敏度，可以適當提高Gel-Green的工作濃度。
Gel-Green的穩(wěn)定性好，染色重復性高。含SYBR Green的凝膠核酸染色的重復性比較差，這通常是由于SYBR系列染料的穩(wěn)定性差導致的。而Gel-Green的穩(wěn)定性很好，可以室溫長時間保存及使用微波爐加熱。Gel-Green的光穩(wěn)定性良好，可以在室內正常光線下操作而無需避光。由于其熱穩(wěn)定性和光穩(wěn)定性，含Gel-Green的凝膠在核酸染色時的重復性非常好。
Gel-Green可以使用和SYBR Green或EB相同的檢測體系。Gel-Green具有和SYBR Green或SYBR Gold幾乎相同的光學性質，兩者的激發(fā)光和發(fā)射光都非常接近，這樣可以直接用Gel-Green替換SYBR Green，以使用SYBR Green的凝膠觀察、拍照或成像系統(tǒng)(約500nm激發(fā))。對于原來用于EB染料觀察的系統(tǒng)，可以考慮選用信裕生物的替代Gel-Red染料來替代EB，但也可以使用沒有致突變性的Gel-Green來替代EB。使用Gel-Green來替代EB，并且用EB的紫外檢測體系時，檢測靈敏度會比使用Gel-Red低約4-5倍。對于既可以觀察EB也可以觀察SYBR Green的具有紫外和藍光兩種激發(fā)光的凝膠成像系統(tǒng)，則推薦直接用Gel-Green來替換EB。Gel-Green的激發(fā)光譜和發(fā)射光譜請參考圖1。

圖1. Gel-Green的激發(fā)光譜和發(fā)射光譜

Gel-Green的使用方法和EB一致。Gel-Green可以按適當比例直接加入瓊脂糖中配制成凝膠，也可以在電泳完畢后對凝膠進行染色。前者更加方便，而后者靈敏度要更加高一些。但由于Gel-Green本身已經非常靈敏，通常采用把Gel-Green直接配制在凝膠中就可以了。對于一些特殊的情況，如核酸樣品量特別少的情況等，則可以考慮電泳后再對凝膠進行染色。
Gel-Green對于核酸的遷移率影響非常小，小于SYBR Green對于核酸遷移率的影響。
通過凝膠回收試劑盒(如信裕生物或Qiagen的凝膠回收試劑盒)或酚氯仿抽提，可以有效去除與DNA或RNA結合的Gel-Green，從而確保不會影響后續(xù)的連接、酶切、PCR、測序等常規(guī)的分子生物學用途。
使用說明：
Gel-Green和EB(溴化乙錠)一樣可以根據使用者的偏好或實驗目的采用以下方法中的一種： 
1. 瓊脂糖凝膠中添加Gel-Green。
根據需要配制適當濃度(例如1-3%)的瓊脂糖膠液。在瓊脂糖完全融解后，適當冷卻但又不會使瓊脂糖凝固時，按照每100毫升膠液加入10微升Gel-Green的比例(10000:1)加入Gel-Green。混勻后即可把瓊脂糖膠液倒入制備凝膠的模具中。適當量的DNA或RNA在該膠中電泳后，用約500nm波長藍光激發(fā)或相應的凝膠成像系統(tǒng)檢測(也可以使用常規(guī)的紫外燈或紫外凝膠成像檢測系統(tǒng))，就可以觀察到明亮的核酸條帶。說明：Gel-Green非常穩(wěn)定，所以Gel-Green可以像EB一樣在瓊脂糖凝膠液加熱融解后但未凝固前加入并混勻，也可以在瓊脂糖融解前加入然后再微波爐加熱融解并混勻。
2. 電泳完畢后對瓊脂糖凝膠染色。
按照每100毫升100mM NaCl溶液或水中加入20-40微升Gel-Green的比例(2500-5000:1)加入Gel-Green，配制成Gel-Green染色液。把電泳完畢的瓊脂糖凝膠放到適當的容器中，加入適量上述配制好的Gel-Green染色液，確保至少蓋住凝膠。在搖床上緩慢搖動(30-50rpm)染色20-30分鐘。染色的時間根據膠的厚度而定，膠厚則染色時間需要長一些，膠薄則染色時間可以短一些。染色完畢后，在紫外燈下即可觀察DNA條帶。要觀察到更為清晰的條帶，可以在染色后用水漂洗1-2次，每次3-5分鐘，以消除背景，然后用約500nm波長藍光激發(fā)或相應的凝膠成像系統(tǒng)檢測(也可以使用常規(guī)的紫外燈或紫外凝膠成像檢測系統(tǒng))。Gel-Green染色液可以重復使用3次左右。Gel-Green染色液也可以一次大量制備，在室溫下避光保存，直至用完。對于核酸需要回收的情況，操作過程中需要注意避免核酸酶污染。