檢測原理：

本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附檢測技術。特異性抗小鼠 IL-12 p70抗體預包被在高親和力的酶標板上。酶標板孔中加入標準品、待測樣本和生物素化的檢測抗體，經過孵育，樣本中存在的 IL-12 p70與固相抗體和檢測抗體結合，形成免疫復合物。洗滌去除未結合的物質后，加入辣根過氧化物酶標記的鏈霉親和素(Streptavidin-HRP)。洗滌后，加入顯色底物，避光顯色。加入終止液終止反應，在450 nm波長(參考校正波長540nm或570nm)測定吸光度值。

檢測類型：雙抗夾心法

形式：預包被96孔板

檢測樣本類型：細胞上清液，血清，血漿

上樣量：100ul

試劑盒組分：

預包被96孔板、標準品、抗小鼠 IL-12 p70檢測抗體、稀釋用緩沖液、顯色液（A、B）、洗滌液、終止液、SA-HRP、封板膜和說明書一份。

靈敏度：2.24 pg/mL

檢測范圍：39.1 - 2,500 pg/mL

回收率范圍：83-107%

保存方法：2-8℃

標準曲線圖

背景：

白細胞介素 12（IL-12， 也稱 NKSF）， 是 70-75kDa 的異源二聚體糖蛋白， 屬于 IL-12異源二聚體細胞因子家族。 IL-12 由 35 kDa(p35)和 40 kDa(p40) 的兩個亞基構成，這兩個亞基由二硫鍵相連， 相互間無氨基酸序列同源性。 成熟的 p35 亞基有 196 個氨基酸， 包含七個半胱氨酸及一個潛在的 N-連接糖基化位點。 成熟的小鼠 p35 與人和大鼠的氨基酸同源性分別為 63%和 86%。 成熟的小鼠 p40 亞基長 313個氨基酸， 包括 13 個半胱氨酸和 5 個潛在的 N-連接糖基化位點。 有研究報道 p40 序列具有多態(tài)性， 但 R&D systems 的這個 IL-12 p70 試劑盒不識別這些等位基因產物。

成熟的小鼠 p40 和人及大鼠的氨基酸同源性分別為 72%和 93%。 雖然 p35類似于促紅細胞生成素的配體， 但 p40 更類似促紅細胞生成素受體的 N-端， 有 WSXWS結構域、 一個免疫球蛋白樣結構域和四個保守的半胱氨酸。 這表明 IL-12 可能是細胞因子受體模擬物， 類似于 IL-6/可溶性 IL-6R 復合物。 值得注意的是 p40可以以單體或同源二聚體形式存在， 而 p35 卻從來沒有發(fā)現(xiàn)單體形式。 p40 是白介素 23（IL-23） 兩個亞基中較大的亞基。 雖然 IL-12 一直被認為是一種分泌型分子， 人們在人和小鼠細胞中也發(fā)現(xiàn)了膜結合型 IL-12。 產生 IL-12 的細胞包括巨噬細胞、 樹突狀細胞、 單核細胞、 朗格漢斯細胞、 中性粒細胞、角質形成細胞、 類漿樹突狀細胞、 小膠質細胞、 CD8+ DC（僅小鼠細胞）和非生發(fā)中心的（CD38-CD44+） B 細胞（僅人體細胞）。

小鼠 IL-12 的高親和力受體是由至少 2 個 I 型跨膜糖蛋白組成， 類似于細胞因子受體超家族成員。 個亞基（Rβ1） 為 100 kDa， 以 Kd= 1nM 與 IL-12 結合。 這個受體是 p40 亞基的主要結合位點； 第二個亞基（Rβ2） 為 130 kDa， 與 Rβ1亞基無氨基酸同源性。 這個受體是信號轉導的重要組成部分， 作為一個二硫鍵相連的 p30-p40 二聚體的附著點。 如上所述， 小鼠 p40 以單體、 二聚體形式存在， 或于 p35 結合形成 IL-12， 或于 p19 結合形成 IL-23。 同源二聚體 p40 和 IL-23 都可以結合 IL-12R， 作為不傳遞信號的拮抗劑。 或者 p40同源二聚體也可以與 Rβ1 結合， 激活小膠質細胞和巨噬細胞。從功能上而言， IL-12 已被證明能夠增強細胞毒性、 誘導 NK 細胞、 T 細胞和樹突狀表皮 T 細胞產生γ干擾素。 有報道表明， IL-12 能誘導巨噬細胞產生γ干擾素。 與 IL-23 和 IL-27 等其 IL-12 的家族成員一起， IL-12 能促進 CD4+ Th1 型免疫反應的進展。 作為感染應答， IL-27 最先分泌， 促進 TH0 向 THR0/1 過度，隨后分泌 IL-12， 產生 Th1 效應細胞。 與 IL-18、 IL-12 一起產生把效應細胞轉化 Th1 記憶細胞， 接著這些細胞被 IL-23 激活。