描述
酶聯(lián)免疫分析技術(shù)(ELISA)廣泛用于抗原、半抗原或抗體的定量或定性分析,辣根過氧化物酶(HRP) 及其偶聯(lián)物是 ELISA 技術(shù)常用的一種酶,能催化底物如 3,3'5,5'-四甲基聯(lián)苯胺(TMB)發(fā)生顯色反應(yīng),從而進(jìn)行定量或定性分析。由于 TMB 比其他顯色底物具更高的靈敏度且無致癌性被廣泛使用,TMB 主要用于 ELISA,免疫斑點(diǎn)雜交或免疫組化等實(shí)驗(yàn),也有報(bào)道將其用于氯的檢測(cè)分析。
通常 TMB 顯色試劑由多個(gè)組分構(gòu)成,必須在使用前進(jìn)行配制,并且容易產(chǎn)生沉淀,使用相對(duì)不便且容易導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果不穩(wěn)定。本品采用全新的 TMB 顯色技術(shù),將所有相關(guān)試劑全部配在一個(gè)溶液,即僅由單一溶液組成,不僅簡(jiǎn)化了操作步驟,而且使檢測(cè)結(jié)果更加穩(wěn)定可靠。
本品專門為 ELISA 實(shí)驗(yàn)而設(shè)計(jì)。檢測(cè)原理在于 HRP 或其他適當(dāng)過氧化物酶能催化生成可溶的藍(lán)色產(chǎn)物, 此時(shí)通??稍?370nm 測(cè)定吸光度。當(dāng)顯色反應(yīng)被酸性溶液(如 0.5-2M H2SO4,0.5M HCl,1M H3PO4)終止后,產(chǎn)物由藍(lán)色轉(zhuǎn)為黃色,此時(shí)可在 450nm 測(cè)定吸光度。由于本品顯色敏感度高,線性濃度范圍較寬, 極其適合用于定量 ELISA 分析。
本品用于 ELISA 檢測(cè),每個(gè)樣品通常使用 0.1ml 顯色液,則 100ml 本品約檢測(cè) 1000 個(gè)樣品,500ml 本品約檢測(cè) 5000 個(gè)樣品。
使用方法
使用方法(ELISA)
(1)使用之前,取出適量單組份 TMB 顯色液,使其回到室溫再開始使用;
(2)參考 ELISA 檢測(cè)試劑盒的實(shí)驗(yàn)步驟,當(dāng)與 HRP 標(biāo)記抗體孵育一段時(shí)間后,用適當(dāng)洗滌液洗滌 3-5 次, 每次 3-5min。
(3)洗滌完畢后,去除洗滌液,加入 100μl 單組份 TMB 顯色液。
(4)室溫避光孵育 5-30min 或更長時(shí)間(可長達(dá) 24h),直至顯色到預(yù)期深淺?!咀⒁狻浚航ㄗh根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求選擇試劑用量、顯色時(shí)間和反應(yīng)溫度。
(5)直接在 370nm 測(cè)定吸光度?;蛘呒尤?100μl 0.5-2M H2SO4 終止反應(yīng),隨后在 450nm 測(cè)定吸光度。
儲(chǔ)存/保存方法
2-8℃避光保存,有效期24個(gè)月
注意事項(xiàng)
1、本品含TMB和H2O2,對(duì)人體有刺激性,請(qǐng)注意防護(hù)。
2、如發(fā)現(xiàn)本品出現(xiàn)渾濁或顏色變?yōu)樗{(lán)色,請(qǐng)停止使用。
3、為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
關(guān)鍵字: 單組分TMB顯色液
愛必信(上海)生物科技有限公司成立于2010年,位于上海市申江科創(chuàng)園。是一家自主研發(fā)和生產(chǎn)生物試劑的公司。
Absin?是愛必信(上海)生物科技有限公司的試劑品牌,目前已近60萬種生化試劑,10萬種抗體,其基礎(chǔ)生化試劑在基礎(chǔ)科學(xué)領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用的同時(shí),特色產(chǎn)品線常規(guī)生化試劑,血清,小分子激動(dòng)劑及抑制劑在業(yè)界也備受好評(píng)。
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