名稱 吖啶橙/溴化乙錠雙熒光染色試劑盒/AO-EB Double Fluorescence Staining Kit
規(guī)格 100T

產品組分 
Componets Size Storage
試劑(A): AO solution 200μl 4℃ 避光
試劑(B): EB solution 200μl RT
試劑(C): AO/EB Dilution Buffer 50mL 4℃ 避光
自備材料：熒光顯微鏡，PBS，細胞計數(shù)板，載玻片、蓋玻片

有效期：12個月

產品簡介 

吖啶橙(Acridine Orange, AO)屬于三環(huán)雜芳香燃料，可以標記DNA、RNA,屬于異染性熒光染料， AO常用于細胞內DNA和RNA進行檢測。AO與核酸結合方式主要有：1、插入性結合，AO嵌入核酸雙鏈的堿基對之間，這種結合方式主要為AO與DNA的結合，其熒光發(fā)射峰為530nm，激發(fā)后呈綠色熒光；2、靜電吸引，帶正電荷的AO與單鏈核酸的磷酸根(帶負電荷)產生靜電間的吸引結合，這種結合方式主要為AO與RNA的結合，其熒光發(fā)射峰為640nm，激發(fā)后呈紅色熒光，少量結合會呈桔黃色或桔紅色熒光。因此，吖啶橙嵌合到雙鏈DNA分子中顯綠色，與DNA單鏈或RNA結合時發(fā)橙紅色熒光。

溴化乙錠(Ethidium Bromide,EB)嵌合到雙鏈DNA或RNA的堿基對中，無堿基特異性，發(fā)紅色熒光。吖啶橙可透過活細胞膜，EB不能通過與活細胞膜具有相同通透性的細胞膜。

操作步驟 

1、 AO/EB 工作液的配制：取試劑(A)、試劑(B)、試劑(C)， 按照試劑(A):試劑(B):試劑(C)=1:1:8 的比例稀釋成 AO/EB 工作液。
2、 每份細胞樣品中加入 AO/EB 工作液 2μl，混合均勻。
3、 低速離心：500g 離心 5min，棄上清。
4、 用 AO/EB Dilution Buffer 重懸細胞，細胞計數(shù)，將細胞密度調整為 0.5~5×106 個/ml。
5、 每 25μl 細胞懸液中，加入 1μl AO/EB 工作液，充分混勻。
6、 取潔凈載玻片，滴加上 5μl 細胞懸液，輕輕蓋上蓋玻片。
7、 在熒光顯微鏡 B 域進行觀察。


染色結果 

活細胞>>綠色熒光
死細胞>>橙色熒光

注意事項 

1、用能通過活細胞膜與 DNA 結合后發(fā)藍色熒光的 Hoechist 33342 和只能通過死細胞與DNA 結合后収紅色熒光的碘化吡啶( propidium iodide，PI)對細胞進行雙染的方法也比較常用。
2、 如有低溫離心機進行離心效果更佳。
3、 操作過程中應注意減少試劑(A)、試劑(B)暴露于強光下的時間。
4、 EB solution 有一定毒性，請小心操作。
5、含酚紅培養(yǎng)基對觀察有輕微影響。建議使用無酚紅培養(yǎng)基。
6、染色液工作濃度和染色時間可根據(jù)具體實驗情況適當調整，以期達到效果。
7、 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。