名稱 吖啶橙/溴化乙錠雙熒光染色試劑盒/AO-EB Double Fluorescence Staining Kit 規(guī)格 100T 產品組分 Componets Size Storage 試劑(A): AO solution 200μl 4℃ 避光 試劑(B): EB solution 200μl RT 試劑(C): AO/EB Dilution Buffer 50mL 4℃ 避光 自備材料:熒光顯微鏡,PBS,細胞計數(shù)板,載玻片、蓋玻片 有效期:12個月 產品簡介 吖啶橙(Acridine Orange, AO)屬于三環(huán)雜芳香燃料,可以標記DNA、RNA,屬于異染性熒光染料, AO常用于細胞內DNA和RNA進行檢測。AO與核酸結合方式主要有:1、插入性結合,AO嵌入核酸雙鏈的堿基對之間,這種結合方式主要為AO與DNA的結合,其熒光發(fā)射峰為530nm,激發(fā)后呈綠色熒光;2、靜電吸引,帶正電荷的AO與單鏈核酸的磷酸根(帶負電荷)產生靜電間的吸引結合,這種結合方式主要為AO與RNA的結合,其熒光發(fā)射峰為640nm,激發(fā)后呈紅色熒光,少量結合會呈桔黃色或桔紅色熒光。因此,吖啶橙嵌合到雙鏈DNA分子中顯綠色,與DNA單鏈或RNA結合時發(fā)橙紅色熒光。 溴化乙錠(Ethidium Bromide,EB)嵌合到雙鏈DNA或RNA的堿基對中,無堿基特異性,發(fā)紅色熒光。吖啶橙可透過活細胞膜,EB不能通過與活細胞膜具有相同通透性的細胞膜。 操作步驟 1、 AO/EB 工作液的配制:取試劑(A)、試劑(B)、試劑(C), 按照試劑(A):試劑(B):試劑(C)=1:1:8 的比例稀釋成 AO/EB 工作液。 2、 每份細胞樣品中加入 AO/EB 工作液 2μl,混合均勻。 3、 低速離心:500g 離心 5min,棄上清。 4、 用 AO/EB Dilution Buffer 重懸細胞,細胞計數(shù),將細胞密度調整為 0.5~5×106 個/ml。 5、 每 25μl 細胞懸液中,加入 1μl AO/EB 工作液,充分混勻。 6、 取潔凈載玻片,滴加上 5μl 細胞懸液,輕輕蓋上蓋玻片。 7、 在熒光顯微鏡 B 域進行觀察。 染色結果 活細胞>>綠色熒光 死細胞>>橙色熒光 注意事項 1、用能通過活細胞膜與 DNA 結合后發(fā)藍色熒光的 Hoechist 33342 和只能通過死細胞與DNA 結合后収紅色熒光的碘化吡啶( propidium iodide,PI)對細胞進行雙染的方法也比較常用。 2、 如有低溫離心機進行離心效果更佳。 3、 操作過程中應注意減少試劑(A)、試劑(B)暴露于強光下的時間。 4、 EB solution 有一定毒性,請小心操作。 5、含酚紅培養(yǎng)基對觀察有輕微影響。建議使用無酚紅培養(yǎng)基。 6、染色液工作濃度和染色時間可根據(jù)具體實驗情況適當調整,以期達到效果。 7、 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
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