名稱 酵母細(xì)胞總蛋白提取試劑盒 (Yeast Proein Extraction Kit)
規(guī)格 50T
存儲(chǔ) Store at 4℃ (本試劑在室溫干燥條件下，可保存6 個(gè)月。酵母細(xì)胞懸浮液、100×蛋白酶抑制劑和50%甘油2-8℃保存)

試劑盒組成 
酵母細(xì)胞蛋白裂解液 50ml
酵母細(xì)胞漂洗液 120ml
酵母細(xì)胞懸浮液 50ml
100×蛋白酶抑制劑 0.6ml
50% 甘油 10ml
說明書 1份


產(chǎn)品簡(jiǎn)介 

1、總論：經(jīng)典的細(xì)胞蛋白質(zhì)分離流程由下述主要步驟組成：清洗組織或細(xì)胞；裂解細(xì)胞；離心去沉淀獲得可溶性蛋白質(zhì)粗提物（可依據(jù)目標(biāo)蛋白質(zhì)的理化特性特別的調(diào)配裂解緩沖液），目的蛋白質(zhì)是膜蛋白時(shí)用去垢劑處理；通過有機(jī)溶劑或鹽析等沉淀離心、層析、電泳等方法進(jìn)一步純化，得到目的產(chǎn)物蛋白。 
 
2、本試劑盒用于從酵母細(xì)胞中快速、高效而溫和地抽提可溶性蛋白。采用本試劑處理，可以避免激烈的機(jī)械處理造成的氧化和熱度升高對(duì)目的蛋白的破壞作用。使用方便，避免了重復(fù)性差的研磨法，超聲波法或壓榨法對(duì)酵母細(xì)胞的破壞。


使用說明 

1. 離心收集在選擇壓力下靜止培養(yǎng)的酵母培養(yǎng)物的沉淀（一般而言，12,000rpm 離心30 秒鐘，連續(xù)收集多次）酵母細(xì)胞, 按照每克酵母濕菌取用3ml 
酵母細(xì)胞懸浮液的比例，于室溫將細(xì)胞懸浮起來后，然后放置于30℃保溫60-90分鐘。其間每20 分鐘顛倒混勻一次。（先懸浮起來，然后離心去除酵母細(xì)胞懸浮液）


>>為了獲得高質(zhì)量的酵母蛋白，培養(yǎng)酵母的時(shí)間不宜過長(zhǎng)，一般為12-24個(gè)小時(shí)。 
>>由于培養(yǎng)的酵母菌液濃度不同,因此加入酵母細(xì)胞懸浮液后放置于37℃保溫的時(shí)間用戶可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果在處理的時(shí)間上進(jìn)行調(diào)整,60分鐘只是一個(gè)參考值。 
>>如果酵母細(xì)胞懸浮液不夠，也可以用濃度大于10mg/ml 的消解酶代替。 
 
2．離心除去酵母細(xì)胞懸浮液， 按照每克酵母細(xì)胞/5ml 酵母細(xì)胞漂洗液的比列，混懸酵母細(xì)胞樣品。 
 
3. 離心除去酵母細(xì)胞漂洗液，按照每克酵母細(xì)胞/5ml 酵母細(xì)胞蛋白裂解液和50ul 100×蛋白酶抑制劑的比列，混懸酵母細(xì)胞樣品。 
 
4．混旋或顛倒試管幾次后，20℃～37℃溫育10～20分鐘，同時(shí)輕輕搖動(dòng)。 
 
5．細(xì)胞破碎后的勻漿液，根據(jù)您不同需要可以在12000g 離心10min 到100000g 離心1h范圍離心。沉淀?xiàng)壢?。上清即為含有目的蛋白質(zhì)的粗提物。


 注意事項(xiàng) 

1) 酵母細(xì)胞懸浮液含有高活性消解酶類，即使在30℃作用60 分鐘即 可獲得滿意的溶解。但在4℃保存下。存放時(shí)間久后，可能會(huì)出現(xiàn)酶活性下降，因此，當(dāng)出現(xiàn)這種情況的時(shí)候，用戶可以適當(dāng)添加消解酶至10mg/ml. 
 
2) 若目的蛋白不穩(wěn)定，冰浴中孵育時(shí)間可以減少甚至取消，裂解液內(nèi)加入0.2 倍體積50%甘油也可以穩(wěn)定目的蛋白。 
 
3) 4℃保存。


*請(qǐng)務(wù)必在使用本試劑盒之前閱讀此注意事項(xiàng)！